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ヒトTリンパ節ウイルス1（HTLV-1）の定量的PCR（QPCR）は、末梢血単核細胞における統合されたHTLV-1プロビラルDNAの量を測定するのに役立ちます。日本の多くの研究所は、異なるHTLV-1 QPCR法を開発しています。しかし、6つの独立した研究所が同じサンプルのプロビラル負荷を分析したとき、その結果に5倍の違いがありました。HTLV-1 QPCRを標準化するには、明確に定義された参照資料の準備が必要です。HTLV-1 QPCRの参照材料としての適合性を確認するために、成体T細胞白血病に由来するTL-OM1の統合されたHTLV-1ゲノムと内部コントロール（IC）遺伝子を分析しました。蛍光in situハイブリダイゼーション（FISH）は、TL-OM1ゲノムの1P13の部位で、HTLV-1プロビラスが染色体1にモノクローナル統合されていることを示しました。HTLV-1プロビラルゲノムは、TL-OM1から感染していないT細胞株に移されず、TL-OM1細胞のHTLV-1プロビラルコピー数が安定していることを示唆しています。TL-OM1細胞におけるHTLV-1プロウムとIC遺伝子のコピー数を決定するために、魚、デジタルPCR、およびQPCRを使用しました。これら3つの方法で得られたHTLV-1コピー数は類似しており、結果が正確であることを示唆しています。また、IC遺伝子の1つであるRNase PとのHTLV-1プロウムのコピー数の比率は、3つの方法すべてで一貫していました。これらの発見は、TL-OM1細胞がHTLV-1 QPCRの適切な参照材料であることを示しています。
ヒトTリンパ節ウイルス1（HTLV-1）の定量的PCR（QPCR）は、末梢血単核細胞における統合されたHTLV-1プロビラルDNAの量を測定するのに役立ちます。日本の多くの研究所は、異なるHTLV-1 QPCR法を開発しています。しかし、6つの独立した研究所が同じサンプルのプロビラル負荷を分析したとき、その結果に5倍の違いがありました。HTLV-1 QPCRを標準化するには、明確に定義された参照資料の準備が必要です。HTLV-1 QPCRの参照材料としての適合性を確認するために、成体T細胞白血病に由来するTL-OM1の統合されたHTLV-1ゲノムと内部コントロール（IC）遺伝子を分析しました。蛍光in situハイブリダイゼーション（FISH）は、TL-OM1ゲノムの1P13の部位で、HTLV-1プロビラスが染色体1にモノクローナル統合されていることを示しました。HTLV-1プロビラルゲノムは、TL-OM1から感染していないT細胞株に移されず、TL-OM1細胞のHTLV-1プロビラルコピー数が安定していることを示唆しています。TL-OM1細胞におけるHTLV-1プロウムとIC遺伝子のコピー数を決定するために、魚、デジタルPCR、およびQPCRを使用しました。これら3つの方法で得られたHTLV-1コピー数は類似しており、結果が正確であることを示唆しています。また、IC遺伝子の1つであるRNase PとのHTLV-1プロウムのコピー数の比率は、3つの方法すべてで一貫していました。これらの発見は、TL-OM1細胞がHTLV-1 QPCRの適切な参照材料であることを示しています。
Quantitative PCR (qPCR) for human T-lymphotropic virus 1 (HTLV-1) is useful for measuring the amount of integrated HTLV-1 proviral DNA in peripheral blood mononuclear cells. Many laboratories in Japan have developed different HTLV-1 qPCR methods. However, when six independent laboratories analyzed the proviral load of the same samples, there was a 5-fold difference in their results. To standardize HTLV-1 qPCR, preparation of a well-defined reference material is needed. We analyzed the integrated HTLV-1 genome and the internal control (IC) genes of TL-Om1, a cell line derived from adult T-cell leukemia, to confirm its suitability as a reference material for HTLV-1 qPCR. Fluorescent in situ hybridization (FISH) showed that HTLV-1 provirus was monoclonally integrated in chromosome 1 at the site of 1p13 in the TL-Om1 genome. HTLV-1 proviral genome was not transferred from TL-Om1 to an uninfected T-cell line, suggesting that the HTLV-1 proviral copy number in TL-Om1 cells is stable. To determine the copy number of HTLV-1 provirus and IC genes in TL-Om1 cells, we used FISH, digital PCR, and qPCR. HTLV-1 copy numbers obtained by these three methods were similar, suggesting that their results were accurate. Also, the ratio of the copy number of HTLV-1 provirus to one of the IC genes, RNase P, was consistent for all three methods. These findings indicate that TL-Om1 cells are an appropriate reference material for HTLV-1 qPCR.
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