カンギシジン生合成のリン酸コントロールに関与するリン酸加工プロモーターのクローニングと特性評価

リン酸塩は、カンジシジン生合成に関与する酵素であるp-アミノベンゾ酸（PABA）シンターゼの形成を強く抑制しました。Streptomyces griseusのPABS遺伝子（PABAシンターゼをコードする）のストレプトマイセスでの発現は、0.1 mmを超える濃度でリン酸塩によって抑制されます。しかし、大腸菌におけるPABS遺伝子の発現は、リン酸によって調節されていません。PABS遺伝子の発現のリン酸コントロールは、元の4.5 kb BamHiフラグメントを含むすべてのプラスミドで観察されましたが、PABSプロモーターを運ぶ上流の1 kbフラグメントが削除された場合、リン酸塩調節は見つかりませんでした。プロモータープローブプラスミドPIJ424を使用して、「114-bp」プロモーターがクローニングされました。「114-bp」プロモーターに融合した場合のプロモーターのないカナマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子の発現は、リン酸により強く減少しました（5 mM濃度で90％）。「114-bp」プロモーターが配列決定され、S1マッピングによって識別された最初の転写ヌクレオチドが並べられています。「114-bp」フラグメントは、Streptomycesゲノム（70〜73％GC）と比較して、A + Tリッチ（54％）です。PABS遺伝子の上流領域におけるリン酸コントロール配列（PCS）の存在が提案されています。

Phosphate strongly repressed the formation of p-aminobenzoic acid (PABA) synthase, an enzyme involved in candicidin biosynthesis. Expression in Streptomyces lividans of the pabS gene (encoding PABA synthase) of Streptomyces griseus is repressed by phosphate at concentrations above 0.1 mM. However, expression of the pabS gene in Escherichia coli is not regulated by phosphate. Phosphate control of the expression of the pabS gene was observed in all plasmids containing the original 4.5-kb BamHI fragment, whereas no phosphate regulation was found when an upstream 1-kb fragment that carries the pabS promoter was deleted. Using the promoter-probe plasmid pIJ424, a '114-bp' promoter was cloned. Expression of the promoterless kanamycin phosphotransferase gene when fused to the '114-bp' promoter was strongly reduced by phosphate (90% at 5 mM concentration). The '114-bp' promoter has been sequenced and the first transcribed nucleotide identified by S1 mapping. The '114-bp' fragment is A + T-rich (54%), as compared to the Streptomyces genome (70-73% GC). The presence of a phosphate control sequence (pcs) in the upstream region of the pabS gene is proposed.