転写と翻訳の過程での制限CHO細胞における組換えヒト絨毛性ゴナドトロピン発現を阻害する

ヒト絨毛性ゴナドトロピン（HCG）は、αサブユニットとβサブユニットがジスルフィドブリッジとともに組み立てられたヘテロダイマーとして存在する糖タンパク質ホルモンです。このホルモンは、排卵誘導の検出と、女性の不妊を引き起こす特定の疾患の治療において重要な役割を果たします。CHO細胞における組換えHCG発現に対する転写、サブユニット発現、組み立て、分泌の影響は、FLP-IN™システムによって生成された安定した高生産および低生産細胞株を使用して研究されました。結果は、βサブユニットのmRNAおよびポリペプチドレベルが常にαサブユニットのmRNAレベルよりも高いことを示しています。さらなる研究により、違いはmRNAの安定性ではなく転写速度によって引き起こされたことが確認されました。高生産細胞株では、βサブユニットとは対照的に、αサブユニットの転写レベルの明らかな制限がありました。さらに、αサブユニットとβサブユニット、特にβサブユニットの両方について、mRNAからポリペプチドへの合成ステップに明らかな制限がありました。この研究では、アセンブリと分泌レベルの有意な制限は観察されませんでした。この研究では、二重サブユニットタンパク質発現の研究​​方法を提示し、組換えHCG生産性の向上に関する貴重な証拠を提供します。

Human chorionic gonadotropin (hCG) is a glycoprotein hormone that exists as a heterodimer with a α subunit and β subunit assembled together with disulfide bridges. This hormone plays an important role in the detection of ovulation induction and in the treatment of certain diseases that cause female infertility. The effects of transcription, subunit expression, assembling and secretion on recombinant hCG expression in CHO cells were studied using stable high-producing and low-producing cell lines generated by the FLP-In™ system. The results indicated that the mRNA and polypeptide levels of the β subunit were always higher than those of the α subunit. Further study confirmed that the differences were caused by the transcription rate rather than by mRNA stability. In the high-producing cell lines, there was obvious transcription level limitation of the α subunit in contrast to the β subunit. In addition, there was obvious limitation of the synthetic steps from mRNA to polypeptide for both the α subunit and the β subunit, especially the β subunit. Significant limitations of the assembly and secretion levels were not observed in this research. This study presents a research methodology for double subunit protein expression and provides valuable evidence for the enhancement of recombinant hCG productivity.