キメラ狂犬病SADB19-VSVG-PSEUDOTYTEDレンチウイルスベクターは、マウス脊髄からの長距離逆行性転換を媒介します

レンチウイルスベクターは、脳にトランスジェンを届ける効果的な方法であることが証明されています。しかし、それらはしばしば注射部位からの広がりの欠如によって妨げられます。狂犬病エンベロープ糖タンパク質の一部でウイルスエンベロープを変更すると、長距離軸索投影を使用して逆行性輸送を促進することにより、脳の拡散を強化できます。この研究では、小胞口炎ウイルスのウリオン内ドメインを使用して、狂犬病SADB19またはCVS-N2Cの膜外および膜貫通ドメインを含む2つのキメラ封筒を生成しました。ウイルス粒子は、ホスホグリセロキナーゼプロモーターの制御下で緑色の蛍光タンパク質レポーターコンストラクトを含むパッケージ化されました。両方のベクトルは、糖タンパク質の粒子エンベロープへの統合とin vitroでのニューロンの有意な変換を伴う高速粒子を生成しました。成体マウスのSADB19キメラウイルスベクターの腰椎への注入は、局所ニューロンと軸索末端への遺伝子移動を強く好み、脳幹、視床下部、脳皮質のニューロンへの逆行性輸送を媒介しました。このベクトルの開発は、逆行ターゲティングにより、ニューロンの選択集団を確実にターゲットにするための有用な手段を提供します。

Lentiviral vectors have proved an effective method to deliver transgenes into the brain; however, they are often hampered by a lack of spread from the site of injection. Modifying the viral envelope with a portion of a rabies envelope glycoprotein can enhance spread in the brain by using long-range axon projections to facilitate retrograde transport. In this study, we generated two chimeric envelopes containing the extra-virion and transmembrane domain of rabies SADB19 or CVS-N2c with the intra-virion domain of vesicular stomatitis virus. Viral particles were packaged containing a green fluorescent protein reporter construct under the control of the phosphoglycerokinase promoter. Both vectors produced high-titer particles with successful integration of the glycoproteins into the particle envelope and significant transduction of neurons in vitro. Injection of the SADB19 chimeric viral vector into the lumbar spinal cord of adult mice mediated a strong preference for gene transfer to local neurons and axonal terminals, with retrograde transport to neurons in the brainstem, hypothalamus and cerebral cortex. Development of this vector provides a useful means to reliably target select populations of neurons by retrograde targeting.