ホスホイノシチド依存性プロテインキナーゼ1（PDK1）は、好酸球に対する強力な阻害効果を媒介します

プロスタグランジンE2（PGE2）は、プロスタノイド受容体EP4への結合を介してアレルギー反応から保護します。これは、PI3K/PKC依存的に好酸球の移動を阻害します。ホスホイノシチド依存性プロテインキナーゼ1（PDK1）は、PI3Kシグナル伝達の下流エフェクターとして作用することが知られており、好中球の移動の調節に関与しています。したがって、ここでは、PDK1が好酸球機能に対するE型プロスタノイド受容体4（EP4）受容体の阻害効果を媒介するかどうかを解明します。したがって、好酸球をヒト末梢血から分離するか、マウスBMから分化しました。PDK1シグナル伝達は、形状変化、走化性、CD11B、呼吸バースト、およびCa（2+）動員アッセイで調査されました。特定のPDK1阻害剤BX-912およびGSK2334470は、プロスタグランジンE2およびEP4アゴニストONO-AE1-329による阻害を防ぎました。細胞機能に応じて、PDK1はPI3K依存性またはPI3K非依存のメカニズムを介して作用するように見えました。EP4受容体の刺激は、Ser396でPDK1リン酸化を引き起こし、PDK1のPI3K依存性核移行を誘導しました。EP4による形状変化と走化性の阻害は、AKT阻害剤のトリシリビンによって効果的に逆転しました。この発見を支持して、ONO-AE1-329は、AKTリン酸化のPI3K/PDK1依存性の増加を誘導しました。結論として、我々のデータは、好酸球エフェクター機能上の抑制シグナルを伝達する際のPDK1の重要な役割を示しています。したがって、我々の結果は、PDK1が好酸球性炎症を伴う疾患の新しい治療標的として役立つ可能性があることを示唆しています。

Prostaglandin E2 (PGE2 ) protects against allergic responses via binding to prostanoid receptor EP4, which inhibits eosinophil migration in a PI3K/PKC-dependent fashion. The phosphoinositide-dependent protein kinase 1 (PDK1) is known to act as a downstream effector in PI3K signaling and has been implicated in the regulation of neutrophil migration. Thus, here we elucidate whether PDK1 mediates inhibitory effects of E-type prostanoid receptor 4 (EP4) receptors on eosinophil function. Therefore, eosinophils were isolated from human peripheral blood or differentiated from mouse BM. PDK1 signaling was investigated in shape change, chemotaxis, CD11b, respiratory burst, and Ca(2+) mobilization assays. The specific PDK1 inhibitors BX-912 and GSK2334470 prevented the inhibition by prostaglandin E2 and the EP4 agonist ONO-AE1-329. Depending on the cellular function, PDK1 seemed to act through PI3K-dependent or PI3K-independent mechanisms. Stimulation of EP4 receptors caused PDK1 phosphorylation at Ser396 and induced PI3K-dependent nuclear translocation of PDK1. EP4-induced inhibition of shape change and chemotaxis was effectively reversed by the Akt inhibitor triciribine. In support of this finding, ONO-AE1-329 induced a PI3K/PDK1-dependent increase in Akt phosphorylation. In conclusion, our data illustrate a critical role for PDK1 in transducing inhibitory signals on eosinophil effector function. Thus, our results suggest that PDK1 might serve as a novel therapeutic target in diseases involving eosinophilic inflammation.