Rhodotorula gracilisのD-アミノ酸オキシダーゼの特性

フラボタンパク質D-アミノ酸オキシダーゼは、非常に再現性のある手順により、酵母ロドトララグラシリスからの均一性に精製されました。タンパク質のアミノ酸組成が決定されました。タンパク質モノマーの分子量は39 kDaで、FADの1つの分子が含まれていました。A274/A455の比率は約8.2でした。酵母からのD-アミノ酸オキシダーゼは、競合阻害剤ベンゾ酸の結合で典型的なフラビンスペクトル摂動を示し、嫌気性症の下でのD-アラニンによって減少しました。酵素は亜硫酸塩と容易に反応して共有結合性可逆付加物を形成し、5デアザリボフラビンの存在下で光還元でフラビンセミキノンの赤い陰イオン型を安定させました。3,4-ジヒドロファッド形態は、水素化ナトリウムで減少した後、検出できませんでした。したがって、酵母のD-アミノ酸オキシダーゼは、フラボタンパク質のデヒドロゲナーゼ/オキシダーゼクラスの一般的な特性のほとんどを示しました。同時に、酵素は豚の腎臓の同じタンパク質に関していくつかの特異な特徴を示しました。

The flavoprotein D-amino-acid oxidase was purified to homogeneity from the yeast Rhodotorula gracilis by a highly reproducible procedure. The amino acid composition of the protein was determined; the protein monomer had a molecular mass of 39 kDa and contained one molecule of FAD. The ratio between A274/A455 was about 8.2. D-Amino-acid oxidase from yeast showed typical flavin spectral perturbations on binding of the competitive inhibitor benzoate and was reduced by D-alanine under anaerobiosis. The enzyme reacted readily with sulfite to form a covalent reversible adduct and stabilized the red anionic form of the flavin semiquinone on photoreduction in the presence of 5-deazariboflavin; the 3,4-dihydro-FAD form was not detectable after reduction with sodium borohydride. Thus D-amino-acid oxidase from yeast exhibited most of the general properties of the dehydrogenase/oxidase class of flavoproteins; at the same time, the enzyme showed some peculiar features with respect to the same protein from pig kidney.