ヒトの母乳白血球の特性評価と新生児へのサイトメガロウイルス伝播におけるそれらの潜在的な役割

背景：母乳は、新生児および未熟児へのサイトメガロウイルス（CMV）伝播の主要な供給源です。ウイルス伝播における細胞のない牛乳ホエイの役割はよく理解されていますが、このプロセスにおける乳細胞の役割に関する知識はほとんどありません。 目的：さまざまな授乳中に異なる母乳細胞タイプを事前に特徴づけて、CMVの伝達における潜在的な役割を評価します。 材料と方法：早産児の18人の授乳中の母乳細胞と3 cmVセロ陽性母親の母乳細胞を分離し、フローサイトメトリーによる骨髄性マーカーの発現のために特徴付けました。並行して、シトスピン調製物をα-ナフチルアセテートエステラーゼで染色して、牛乳マクロファージを特定し、授乳中のマクロファージ - 顆粒球集団の動的な変化を説明しました。授乳の異なる時点の影響は、二重染色（CD15/CD66B）乳細胞のFACS分析によって分析されました。母乳中のCMV標的細胞を特徴付けるために、MACS（Miltenyi）でCD14+細胞を濃縮し、CMV IEEX4ネストPCRおよびNASBAによるPP67 CMV RNAを使用して細胞画分を監視しました。 結果：Virolactia、ウイルス性Dnalactia、およびウイルスPP67後期mRNAは、定義された期間でのみ母乳細胞で検出できました。顆粒球とマクロファージは、授乳の後期（産後60日以上）で初期段階（妊娠後30日未満）とマクロファージで支配する好中球が逆動的であることを示しました。CD14陽性細胞の濃縮により、ウイルスDNAとPP67後期mRNA検出が生じました。 結論：顆粒球と単球/マクロファージは、早期授乳中に頻度が変化する母乳の主要な細胞集団です。これらの結果は、CD14陽性母乳細胞が母乳中のCMVの標的細胞の1つであると思われることを示しています。

BACKGROUND: Breast milk is the primary source of cytomegalovirus (CMV) transmission to newborns and premature infants. The role of cell-free milk whey in virus transmission is well understood, yet the knowledge about the role of milk cells in this process is scarce. OBJECTIVE: To preliminarily characterize different breast milk cell types during various stages of lactation to evaluate their potential role in the transmission of CMV. MATERIALS AND METHODS: Breast milk cells of 18 lactating and 3 CMV-seropositive mothers of preterm infants were isolated and characterized for expression of myeloid markers by flow cytometry. In parallel, cytospin preparations were stained with α-naphthyl acetate esterase to identify milk macrophages and describe the dynamic changes of the macrophage-granulocyte population during lactation. The influence of different time points of lactation was analyzed by FACS analysis of double-stained (CD15/CD66b) milk cells. To characterize CMV target cells in breast milk, we enriched CD14+ cells by MACS (Miltenyi) and monitored cell fractions using CMV IEEx4 nested PCR and pp67 CMV RNA by NASBA. RESULTS: Virolactia, viral DNAlactia, and viral pp67 late mRNA could be detected in breast milk cells only in defined time periods. Granulocytes and macrophages demonstrated an inverse dynamic with neutrophils predominating in the early stages (<30 days postpartum) and macrophages in later stages (>60 days postpartum) of lactation. Enrichment of CD14-positive cells resulted in viral DNA and pp67 late mRNA detection. CONCLUSIONS: Granulocytes and monocytes/macrophages are the predominating cell populations in breast milk with changing frequencies during early lactation. These results demonstrate that CD14-positive breast milk cells seem to be one of the target cells for CMV in breast milk.