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ブタ腎細胞株LLC-PK1の3つのクローンを分離し、形態、成長、近位尿細管酵素活性、糖の取り込み能力、および定義された媒体でホルモンと薬物反応性に関して特徴付けました。クローンN4は野生型(WT)との形態が類似していたが、クローンF8は基質への緩い付着を示し、大きくて掃引するドームを形成し、細胞間に細長いデスモソーム接合部を持っていた。3番目のクローンF2はドームを形成せず、成長率の著しい低下を示しました。WT、N4、およびF8の培養物は、成長細胞と比較してコンフルエンスで酵素アルカリホスファターゼおよびガンマ - グルタミルトランスペプチダーゼのより高い特異的活性を持っていました。しかし、F2のコンフルエンスでのいずれかの酵素の活性の増加の証拠はありませんでした。フロリジン感受性のα-メチル-D-グルコシド取り込みとシトカラシンB感受性2-デオキシ-D-グルコース取り込みは、多孔質フィルターサポートで成長したコンフルエントな培養で測定されました。定量的な違いは明らかでしたが、クローンにはヘキソース輸送システムのいずれもありませんでした。96ウェル培養プレートの定義された培地で成長したN4細胞は、分化誘導因子、腫瘍プロモーター、およびホルモンに対する酵素応答についてその場でテストされました。アルカリホスファターゼ活性は、血清、副甲状腺ホルモン(PTH)、およびバソプレシン(AVP)によってコンフルエンスで有意に増加し、酢酸テトラデカノイルフォルボール(TPA)およびエピネフリン(EPI)によって減少しました。血清、TPA、およびEPIによって合流時にグルタミルトランスペプチダーゼ活性が低下しました。アルファメチル-D-グルコシドの取り込みに関する同様のテストでは、血清、TPA、PTH、およびAVPがフロリジン感受性の取り込みに有意な影響がないことが示されました。しかし、カルシトニンは取り込みを84%増加させました(n = 18)。定義された媒体で維持されているLLC-PK1クローンは、腎細胞機能を研究するための有用なモデルであると結論付けられました。
ブタ腎細胞株LLC-PK1の3つのクローンを分離し、形態、成長、近位尿細管酵素活性、糖の取り込み能力、および定義された媒体でホルモンと薬物反応性に関して特徴付けました。クローンN4は野生型(WT)との形態が類似していたが、クローンF8は基質への緩い付着を示し、大きくて掃引するドームを形成し、細胞間に細長いデスモソーム接合部を持っていた。3番目のクローンF2はドームを形成せず、成長率の著しい低下を示しました。WT、N4、およびF8の培養物は、成長細胞と比較してコンフルエンスで酵素アルカリホスファターゼおよびガンマ - グルタミルトランスペプチダーゼのより高い特異的活性を持っていました。しかし、F2のコンフルエンスでのいずれかの酵素の活性の増加の証拠はありませんでした。フロリジン感受性のα-メチル-D-グルコシド取り込みとシトカラシンB感受性2-デオキシ-D-グルコース取り込みは、多孔質フィルターサポートで成長したコンフルエントな培養で測定されました。定量的な違いは明らかでしたが、クローンにはヘキソース輸送システムのいずれもありませんでした。96ウェル培養プレートの定義された培地で成長したN4細胞は、分化誘導因子、腫瘍プロモーター、およびホルモンに対する酵素応答についてその場でテストされました。アルカリホスファターゼ活性は、血清、副甲状腺ホルモン(PTH)、およびバソプレシン(AVP)によってコンフルエンスで有意に増加し、酢酸テトラデカノイルフォルボール(TPA)およびエピネフリン(EPI)によって減少しました。血清、TPA、およびEPIによって合流時にグルタミルトランスペプチダーゼ活性が低下しました。アルファメチル-D-グルコシドの取り込みに関する同様のテストでは、血清、TPA、PTH、およびAVPがフロリジン感受性の取り込みに有意な影響がないことが示されました。しかし、カルシトニンは取り込みを84%増加させました(n = 18)。定義された媒体で維持されているLLC-PK1クローンは、腎細胞機能を研究するための有用なモデルであると結論付けられました。
Three clones of the pig kidney cell line LLC-PK1 were isolated and characterized with regard to morphology, growth, proximal tubule enzyme activity, sugar uptake capacity, and hormone and drug responsiveness in a defined medium. Clone N4 was similar in morphology to the wild type (WT), whereas clone F8 showed loose attachment to the substrate, formed large, sweeping domes, and had an elongated desmosome junction between cells. The third clone, F2, did not form domes and showed a marked reduction in growth rate. Cultures of WT, N4, and F8 had higher specific activities of the enzyme alkaline phosphatase and gamma-glutamyl transpeptidase at confluence relative to growing cells; however, there was no evidence of an increase in activity of either enzyme at confluence in F2. Phlorizin-sensitive alpha-methyl-D-glucoside uptake and cytochalasin B-sensitive 2-deoxy-D-glucose uptake were measured in confluent cultures grown on porous filter supports. None of the clones lacked either of the hexose transport systems, although quantitative differences were evident. N4 cells grown in a defined medium in 96-well culture plates were tested in situ for their enzyme responses to differentiation inducers, tumor promoters, and hormones. Alkaline phosphatase activity was significantly increased at confluence by serum, parathyroid hormone (PTH), and vasopressin (AVP), and was decreased by tetradecanoylphorbol acetate (TPA) and epinephrine (EPI). Glutamyl transpeptidase activity was decreased at confluence by serum, TPA, and EPI. Similar tests on alpha-methyl-D-glucoside uptake showed that serum, TPA, PTH, and AVP had no significant effect on phlorizin-sensitive uptake; however, calcitonin increased uptake by 84% (n = 18). It was concluded that LLC-PK1 clones maintained in a defined medium are useful models for studying renal cell function.
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