ヒト肝臓および血清中のトリス（2-ブトキシエチル）リン酸（TBOEP）のin vitro生体内変化

トリス（2-ブトキシエチル）リン酸（TBOEP）は、屋内ダストに存在する可塑剤であり、グラムあたり数マイクログラムのレベルに達します。このようなレベルは、大人と子供の日々の激しい暴露につながる可能性があります。現在、摂取後のヒトのTBOEPクリアランスを推定するためのトキシコキネティックデータは利用できないため、この研究の1つの目的は、ヒト肝臓ミクロソーム（HLM）および血清酵素によるTBOEPの固有のクリアランスを調査することでした。もう1つの目的は、バイオモニタリングによる人間の暴露の調査のために、TBOEPのいくつかの代謝物を特定し、優先順位を付けるための情報を生成することでした。1Dおよび2D-NMRの方法論は、代謝産物の混合物に正常に適用され、3-HO-TBOEP（BIS（2-ブトキシエチル）3-ヒドロキシル-2-ブトキシエチルリン酸）の構造を確認し、1-HO-TBOEPおよび2-HO-TBOEPに構造を暫定的に割り当てました。Ho-tboep異性体およびビス（2-ブトキシエチル）リン酸（BBOEP）、ビス（2-ブトキシエチル）ヒドロキシエチルリン酸（BBOEHEP）は、液体クロマトグラフィータンデム質量分析によりさらに監視されました。肝臓酵素によるBboehepおよびHo-tboep代謝産物の形成率は、Michaelis-Mentenモデルによって最もよく説明されていました。Bboehep、3-Ho-TBOEP、および1および2-TBOEP異性体の合計の見かけのKM値は、それぞれ152、197、および148μmでした。BBOEHEP、3-HO-TBOEP、および1-HO-TBOEP異性体の合計の形成の見かけのVMAX値は、それぞれ2560、643、および254pmol/min/mgタンパク質でした。肝臓または血清酵素では、BBOEPの検出可能な形成は発生しませんでした。我々の発見は、TBOEPの固有のクリアランスが主に肝臓の酸化酵素によって触媒され、その主要なin vitro代謝物がBboehepであることを示しています。これらの発見は、人間の生体モニタリング研究とリスク評価に適用できます。

Tris(2-butoxyethyl) phosphate (TBOEP) is a plasticizer present in indoor dust, reaching levels of several micrograms per gram. Such levels could lead to significant daily exposure of adults and children. Currently, no toxicokinetic data are available to estimate TBOEP clearance in humans after uptake and therefore, one objective of this study was to investigate intrinsic clearance of TBOEP by human liver microsome (HLM) and serum enzymes. Another objective was to generate information to identify and prioritize several metabolites of TBOEP for investigation of human exposure by biomonitoring. 1D and 2D-NMR methodologies were successfully applied on a mixture of the metabolites to confirm the structure of 3-HO-TBOEP (bis(2-butoxyethyl) 3-hydroxyl-2-butoxyethyl phosphate) and to tentatively assign structures to 1-HO-TBOEP and 2-HO-TBOEP. HO-TBOEP isomers and bis(2-butoxyethyl) phosphate (BBOEP), bis(2-butoxyethyl) hydroxyethyl phosphate (BBOEHEP) were further monitored by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Rates of formation of BBOEHEP and HO-TBOEP metabolites by liver enzymes were best described by the Michaelis-Menten model. Apparent Km values for BBOEHEP, 3-HO-TBOEP, and sum of 1- and 2-HO-TBOEP isomer formation were 152, 197 and 148μM, respectively. Apparent Vmax values for the formation of BBOEHEP, 3-HO-TBOEP, and the sum of 1- and 2-HO-TBOEP isomers were 2560, 643, and 254pmol/min/mg protein, respectively. No detectable formation of BBOEP occurred with liver or serum enzymes. Our findings indicate that intrinsic clearance of TBOEP is mainly catalyzed by oxidative enzymes in the liver and that its major in vitro metabolite is BBOEHEP. These findings can be applied in human biomonitoring studies and risk assessment.