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はじめに：乳酸デヒドロゲナーゼ（LDH）放出の定量化は、細胞生存率と後期アポトーシスの定量的決定のために広く受け入れられているアッセイです。市販のLDHアッセイキットの主要な欠点には、独自の定式化、最適化のための限られたオプション、高コストが含まれ、すべて研究アプリケーションの再現性が限られています。ここでは、グリオ保護のための薬物候補のプレートリーダーベースのスクリーニングのコンテキストで適切な新しいカスタムLDHアッセイについて説明しますが、他の細胞タイプや実験的パラダイムに幅広く適用可能になります。 方法：同等のパフォーマンスを備えた市販のアッセイよりも費用対効果の高い、斬新で非常に再現可能なLDHリリースアッセイを開発しました。アッセイは、C6アストログリオーマ細胞におけるテルトブチルヒドロペルオキシド誘発酸化ストレスに対する6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン - カルボン酸抗酸化剤保護を評価することにより検証されました。アッセイ性能は、直接比較により検証され、細胞生存率を測定する他の方法、すなわち3-（4,5-ジメチルチアゾール-2-イル）-2,5-ジフェニルテトラゾリウム臭化および6-カルボキシ-2 '、7'ジクロロジヒドロフルオレシンジアセテートアッセイ。 結果：新規カスタムアッセイと市販のアッセイCytoTox96®（Promega、Madison、Wi）で得られた結果の間に統計的に有意な差はありませんでした。 説明：新しいカスタムLDHリリースアッセイにより、細胞生存率の再現性のある定量化が可能になり、市販のアッセイと比較すると、費用対効果が高くなります（約25倍安く）。さらに、市販のアッセイとは対照的に、すべてのアッセイコンポーネントと手順の識別と詳細な説明は、実験条件と設計をより強力に制御できます。実験要件に応じて、新しいアッセイを容易に適応させることができる詳細な標準動作手順を提供します。
はじめに：乳酸デヒドロゲナーゼ（LDH）放出の定量化は、細胞生存率と後期アポトーシスの定量的決定のために広く受け入れられているアッセイです。市販のLDHアッセイキットの主要な欠点には、独自の定式化、最適化のための限られたオプション、高コストが含まれ、すべて研究アプリケーションの再現性が限られています。ここでは、グリオ保護のための薬物候補のプレートリーダーベースのスクリーニングのコンテキストで適切な新しいカスタムLDHアッセイについて説明しますが、他の細胞タイプや実験的パラダイムに幅広く適用可能になります。 方法：同等のパフォーマンスを備えた市販のアッセイよりも費用対効果の高い、斬新で非常に再現可能なLDHリリースアッセイを開発しました。アッセイは、C6アストログリオーマ細胞におけるテルトブチルヒドロペルオキシド誘発酸化ストレスに対する6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン - カルボン酸抗酸化剤保護を評価することにより検証されました。アッセイ性能は、直接比較により検証され、細胞生存率を測定する他の方法、すなわち3-（4,5-ジメチルチアゾール-2-イル）-2,5-ジフェニルテトラゾリウム臭化および6-カルボキシ-2 '、7'ジクロロジヒドロフルオレシンジアセテートアッセイ。 結果：新規カスタムアッセイと市販のアッセイCytoTox96®（Promega、Madison、Wi）で得られた結果の間に統計的に有意な差はありませんでした。 説明：新しいカスタムLDHリリースアッセイにより、細胞生存率の再現性のある定量化が可能になり、市販のアッセイと比較すると、費用対効果が高くなります（約25倍安く）。さらに、市販のアッセイとは対照的に、すべてのアッセイコンポーネントと手順の識別と詳細な説明は、実験条件と設計をより強力に制御できます。実験要件に応じて、新しいアッセイを容易に適応させることができる詳細な標準動作手順を提供します。
INTRODUCTION: Quantification of lactate dehydrogenase (LDH) release is a widely accepted assay for the quantitative determination of cell viability and late-stage apoptosis. Major disadvantages of commercially available LDH assay kits include proprietary formulations, limited options for optimization and high cost, all resulting in limited reproducibility in research applications. Here, we describe a novel, custom LDH assay suitable in the context of plate reader-based screening of drug candidates for glioprotection, but with wide applicability to other cell types and experimental paradigms. METHODS: We developed a novel and highly reproducible LDH release assay that is more cost-effective than commercially available assays with comparable performance. The assay was validated by assessing 6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid antioxidant protection against tert-butylhydroperoxide-induced oxidative stress in C6 astroglioma cells. Assay performance was validated by direct comparison and compatible with other methods of measuring cellular viability, namely 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide and 6-carboxy-2', 7' dichlorodihydrofluorescein diacetate assays. RESULTS: There was no statistically significant difference between results obtained with the novel custom assay and a commercially available assay CytoTox96® (Promega, Madison, WI). DISCUSSION: The novel custom LDH release assay allows the reproducible quantification of cell viability and is highly cost-effective when compared to commercially available assays (approximately 25 times cheaper). In addition and in contrast to commercially available assays, the identification and detailed description of all assay components and procedures provide greater control over experimental conditions and design. We provide a detailed standard operating procedure permitting our novel assay to be readily adapted depending on experimental requirements.
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