[臍帯血に由来するMHC制限キラーT細胞の拡張と機能]

目的：この研究は、サイトカインのさまざまな組み合わせを使用して、臍血液単核細胞（UBMNC）の分化を誘導することにより、細胞毒性Tリンパ球（CTL）を拡大し、拡張されたCTLの機能を調査することでした。 方法：MNCは、FICOLL密度勾配遠心分離により分離されました。次に、IL-2、IL-15およびその他のサイトカインと組み合わせたPHA-P、IFN-γを、臍帯血由来CTLの誘導と拡大に使用しました。CTLの生物学的機能は、表現型分析、細胞毒性試験、およびリアルタイム蛍光定量PCRによって調べられました。 結果：15日間の拡張後、細胞数は1522％±137％増加しました。培養されていない臍帯血MNCにおけるCD3（ - ）CD8（ - ）細胞の含有量は95％であり、CD3（+）CD8（+）CTL細胞は、15日間の拡張後、培養臍帯血MNCで82.77％に達しました。拡張されたCTL細胞は、K562およびHELA細胞株に対する細胞毒性活性を示しました。MNCの殺人率は61.88±1.08％でした。拡張後、殺人率は90.33±2.02％の平均値で90％に達する可能性があります。拡張されたCTL細胞は、グランザイムA、グランザイムB、GM-CSF、グラニュリシン、IFN-γ、TGF-β、TNF-α、フォルフォリンなどのいくつかの重要なサイトカインを高く発現しました。対照群と比較して、IFN-γおよびTGF-βの発現は有意に増加し（P <0.05）、他の因子が劇的に増加しました（P <0.01）。 結論：臍帯血由来のCTLは、サイトカインのさまざまな組み合わせによって拡張できます。これらのプロトコルは、腫瘍採用免疫療法におけるCTL細胞拡大のための代替選択を提供する可能性があります。

OBJECTIVE: This study was to expand the cytotoxic T lymphocytes (CTL) through inducing the differentiation of umbilical blood monomuclear cells (UBMNC) by using various combination of cytokines, and to investigate the functions of expanded CTL. METHODS: The MNC were isolated by ficoll density gradient centrifugation. Then, the PHA-P, IFN-γ combined with IL-2, IL-15 and other cytokines were used for induction and expansion of the cord blood-derived CTL. The biological function of CTL was examined by phenotype analysis, cytotoxic tests and real-time fluorescence quantitative PCR. RESULTS: After expansion for 15 days, the cell number increased by 1522% ± 137%. The content of CD3(-)CD8(-) cells in uncultured cord blood MNC was 95%, and the CD3(+)CD8(+) CTL cells reached 82.77% in cultured cord blood MNC after expansion for 15 days. The expanded CTL cell showed the cytotoxic activity against K562 and HeLa cell line. The killing rate of MNC was 61.88 ± 1.08%. After expansion, the killing rate could reach to 90% with the average value of 90.33 ± 2.02%. The expanded CTL cells highly expressed some key cytokines, such as granzyme A, granzyme B, GM-CSF, granulysin, IFN-γ, TGF-β, TNF-α and perforin. Compared with the control group, the expression of IFN-γ and TGF-β significantly increased (P < 0.05), and the other factors dramatically increased (P < 0.01). CONCLUSION: The cord blood-derived CTL can be expanded by different combinations of cytokines. These protocols may provide alternative choices for CTL cell expansion in tumor adoptive immunotherapy.