アミノ酸を分析し、HPLCによる前糸誘導体化を使用した神経伝達物質の定量化を最適化する最適な励起と放出波長

オパアミノ酸の蛍光励起（λex）および放射（λem）スペクトル波長の研究を通じて、高い感度とより良い解像度を得るための分析方法論について説明します。スペクトル放出研究では、アスパラギン酸塩とグルタミンで450 nmの最大信号ピークが明らかになりました。グリシン、タウリン、およびGABAの場合、最大信号ピークは448で、グルタミン酸は452 nmでした。分析された残りのアミノ酸は、約450 nm前後の最大放出を示しました。スペクトル励起実験内で得られた最良の信号は、229〜450 nmのλ-Ex-λemを使用することでした。これらの波長で観察された欠点は、ベースラインドリフトと負のピークが発生しました。したがって、非常に良好なシグナル応答とベースライン安定性との間の妥協として、240 nmの励起波長が選択され（240〜450 nmλ-Ex-λem）、研究された18アミノ酸を解決するベースラインの安定性が選択されました。さらに、このプロトコルは適切に検証されました。一方、神経活性アミノ酸（アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、タウリン、GABA）に使用される溶出勾配プログラムは、それらすべてで15分間の走行でベースラインへの分離を示しました。最大18歳までの他のアミノ酸も、25分間のランで非常に良好な分離を示しました。結論として、Opa-Amino Acids分析では、最適なシグナル応答を得るのに最も適したプロトコルとして、240〜450 nmのλ-Ex-λem波長を使用することを提案し、最適なクロマトグラフィー解像度を維持します。

We describe an analytical methodology to obtain high sensitivity and better resolution through the study of fluorometric excitation (λex) and emission (λem) spectrum wavelengths of OPA-amino acids. The spectrum emission study revealed a maximum signal peak at 450 nm for aspartate and glutamine. For glycine, taurine, and GABA, the maximum signal peak was at 448 and for glutamate at 452 nm. The remaining amino acids analyzed showed a maximum emission around 450 nm. The best signal obtained within the spectrum excitation experiments was using 229- to 450-nm λex-λem. The drawbacks observed at these wavelengths were a baseline drift and negative peaks occurrence. Thus, the excitation wavelength of 240 nm was chosen (240- to 450-nm λex-λem) as a compromise between a very good signal response and a baseline stability to resolve the 18 amino acids studied. Furthermore, this protocol was properly validated. On the other hand, the elution gradient program used for neuroactive amino acids (aspartate, glutamate, glycine, taurine and GABA) showed separation to the baseline, in a 15-min run in all of them. Other amino acids, up to 18, also exhibited a very good separation in a 25-min run. In conclusion, we propose the use of 240- to 450-nm λex-λem wavelengths, in OPA-amino acids analysis, as the most suitable protocol to obtain the best signal response, maintaining an optimum chromatographic resolution.