培養細胞への抗体送達に対する抗体を捕捉するための異なる戦略の採用の影響

培養HELA細胞への抗体送達の特性を、2つの送達システムを使用して調べました。両方のシステムは、細胞への抗体を細胞に侵入するためのツールとして細胞に浸透するペプチドを使用しましたが、抗体を捕捉するために「タンパク質A誘導体」または「疎水性モチーフ」のいずれかが使用されました。これら2つのシステムを使用してAlexa蛍光標識抗体の取り込みを調べたとき、両方のシステムが培養細胞に効果的に抗体を送達することがわかった。ただし、これらのシステムから送達された抗体の量をトランスフェリン摂取量と比較した場合、前者は後者の10倍でした。トランスフェリンの取り込みよりも抗体送達の効率が低いことは、抗体分子を捕まえることができなかった抗体送達試薬の関与に起因するように思われました。この解釈は、より多くの抗体を使用した実験によって検証され、この条件下での「タンパク質A誘導体」システムによって送達される抗体の量は、13 ngタンパク質/10（5）細胞であると判断されました。「タンパク質A誘導体」または「疎水性モチーフ」によって達成された抗体送達は、2つの違い、すなわち、送達された抗体分子の細胞内分布の違いと、細胞溶解物で観察される蛍光スペクトルの違いを示しました。2つの配信システム間のこれらの違いの考えられる理由について説明します。

The characteristics of antibody delivery into cultured HeLa cells were examined using two delivery systems. Both systems used a cell-penetrating peptide as a tool for intrusion of an antibody into the cells, but either a "protein A derivative" or "hydrophobic motif" was employed to capture the antibody. When we examined the uptake of the Alexa Fluor-labeled antibody by the use of these two systems, both systems were found to effectively deliver the antibody into the cultured cells. However, when we compared the amount of antibody delivered by these systems with the amount of transferrin uptake, the former was 10 times smaller than the latter. The lower efficiency of antibody delivery than transferrin uptake seemed to be attributable to the involvement of the antibody delivery reagent, which failed to catch the antibody molecule. This interpretation was validated by an experiment using a larger amount of antibody, and the amount of antibody delivered by the "protein A derivative" system under this condition was determined to be 13 ng proteins/10(5) cells. The antibody delivery achieved by the "protein A derivative" or "hydrophobic motif" showed two differences, i.e., a difference in intracellular distribution of the delivered antibody molecules and a difference in the fluorescence spectrum observed with cellular lysates. Possible reasons for these differences between the two delivery systems are discussed.