健康な男性と女性の生物等価研究をサポートするために、ヒト血漿中のアロセトロンの分析のためのUPLC-MS/MSメソッドの適用

シンプルで迅速で敏感な超パフォーマンス液体クロマトグラフィータンデム質量分析（UPLC-MS/MS）メソッドが開発され、ヒト血漿中のアロセトロン（ALO）の測定のために検証されています。アッセイ法は、Lichrosep DVB-HL（30 mg、1 cm（3））カートリッジ上の内部標準（IS）としてのALOおよびALO 13C-D3の固相抽出を含みました。クロマトグラフィーは、アセトニトリルと2.0 mmの形成アンモニウムを使用して、0.1％ギ酸（80:20、v/v）で調整されたpH 3.0を使用して、アセトニトリルと2.0 mmの形成を使用して、獲得UPLC Beh C18（50×2.1 mm、1.7 µm）カラムで実行されました。定量分析のために、研究された複数の反応モニタリング遷移は、ALOの場合はM/Z 295.1/201.0であり、M/Z 299.1/205.1は正のイオン化モードでした。この方法は、ALOの0.01-10.0 ng/mlの濃度範囲で検証されました。カラム後の注入実験では、分析物の溶出範囲に正または負のピークが示されておらず、抽出された空白血漿の注入後です。IS正規化マトリックス因子として表されるイオン抑制/強化の程度は、0.96から1.04まで変化しました。アッセイの回復は、ALOの97-103％以内でした。この方法は、28人の健康なインドの男性および女性の被験者における1.0 mgのアロセトロン錠剤の生物等価研究をサポートするために成功裏に適用されました。

A simple, rapid and sensitive ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) method has been developed and validated for the determination of alosetron (ALO) in human plasma. The assay method involved solid-phase extraction of ALO and ALO 13C-d3 as internal standard (IS) on a LichroSep DVB-HL (30 mg, 1 cm(3) ) cartridge. The chromatography was performed on an Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2.1 mm, 1.7 µm) column using acetonitrile and 2.0 mm ammonium formate, pH 3.0 adjusted with 0.1% formic acid (80:20, v/v) as the mobile phase in an isocratic mode. For quantitative analysis, the multiple reaction monitoring transitions studied were m/z 295.1/201.0 for ALO and m/z 299.1/205.1 for IS in the positive ionization mode. The method was validated over a concentration range of 0.01-10.0 ng/mL for ALO. Post-column infusion experiment showed no positive or negative peaks in the elution range of the analyte and IS after injection of extracted blank plasma. The extent of ion-suppression/enhancement, expressed as IS-normalized matrix factor, varied from 0.96 to 1.04. The assay recovery was within 97-103% for ALO and IS. The method was successfully applied to support a bioequivalence study of 1.0 mg alosetron tablets in 28 healthy Indian male and female subjects.