ヒトおよびマウスの血清におけるヘプシジン-25測定のためのLC-MS/MSメソッド：鉄障害における臨床および研究の意味

背景：ペプチドヘプシジンは、栄養鉄の吸収と体内鉄の分布の調節において中心的な役割を果たします。この25アミノ酸ホルモンは、主に肝細胞によって生成および分泌されます。ヘプシジンは、鉄関連障害の有望な診断マーカーとして示唆されています。ただし、臨床使用のための正確な定量化はこれまでのところ困難です。このレポートでは、タンデム質量分析（LC-MS/MS）と組み合わせた液体クロマトグラフィーを使用した非常に特異的かつ定量的な血清ヘプシジン法について説明します。 材料：分析的検証には、検出、定量化、再現性、再現性、および直線性の限界の決定が含まれていました。このアッセイは、ヒトおよびマウスのヘプシジン向けに開発されました。ヒトアッセイは、原因不明の微妙な貧血の血清患者に対して行われました。さまざまな条件でマウスのヘプシジン-1を定量化するためのLC-MS/MSメソッドを適用しました：炎症、溶血性貧血、HAMP-1、HJV、およびHFE KOマウス。 結果：LC-MS/MSは、臨床サンプルにおけるヘプシジン-25の正確な決定に適していることを示しており、それによって鉄関連疾患の臨床診断と追跡に有用なツールを表しています。マウスでは、肝HAMP-1 mRNA発現と血清ヘプシジン-1レベルの間に強い相関が見つかりました（r = 0.88; p = 0.0002）、鉄障害のマウスモデルの予想される変動が観察されました。 結論：したがって、この適応型LC-MS/MSメソッドは、臨床サンプルにおけるヘプシジン-25を正確に決定するための適切な方法として、また臨床診断、フォローアップ、および鉄関連障害の管理に寄与する主要なツールとして提案します。また、種間抗原性の制限なしに動物モデルでヘプシジンを測定するための新しい手段を開きます。

BACKGROUND: The peptide hepcidin plays a central role in regulating dietary iron absorption and body iron distribution. This 25-amino acid hormone is produced and secreted predominantly by hepatocytes. Hepcidin has been suggested as a promising diagnostic marker for iron-related disorders. However, its accurate quantification for clinical use remains so far challenging. In this report we describe a highly specific and quantitative serum hepcidin method using liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). MATERIAL: The analytical validation included the determination of the limit of detection, of quantification, repeatability, reproducibility and linearity. This assay was developed for human and mouse hepcidin. The human assay was performed on serum patients with unexplained microcytic anemia. We applied our LC-MS/MS method for quantifying hepcidin-1 in mouse in various conditions: inflammation, hemolytic anemia, Hamp-1, Hjv and Hfe KO mice. RESULTS: We show that the LC-MS/MS is suitable for accurate determination of hepcidin-25 in clinical samples, thereby representing a useful tool for the clinical diagnosis and follow-up of iron-related diseases. In mouse, a strong correlation between hepatic Hamp-1 mRNA expression and serum hepcidin-1 levels was found (r=0.88; p=0.0002) and the expected variations in mouse models of iron disorders were observed. CONCLUSIONS: Therefore, we propose this adaptive LC-MS/MS method as a suitable method for accurate determination of hepcidin-25 in clinical samples and as a major tool contributing to the clinical diagnosis, follow-up and management of iron-related disorders. It also opens new avenues to measure hepcidin in animal models without interspecies antigenic limitations.