薬物候補1-イソプロピル-4-（4-イソプロピルフェニル）-6-（Prop-2-yn-1- Yloxy）Quinazolin-2（1H） - のマイクロプロパラ除去およびNMR構造の代謝産物の解明

LC-MSベースの薬物代謝研究は、代謝産物の迅速な部分構造同定のための創薬の最適化段階で効果的です。ただし、これらの研究は通常、MSベースの構造識別の制限により、すべての代謝物の明確な構造特性を提供しません。LC-MS-SPE-NMRは、完全な構造の識別を可能にする手法ですが、高濃度での内因性の干渉の存在のために、複雑なin vivoサンプル（in vivo薬物代謝研究中に収集された胆汁など）に適用することは困難です。コンポーネント、および潜在的に投与量の筋肉コンポーネント（ポリエチレングリコールなど）。ここでは、薬物開発候補1-イソプロピル-4-（4-イソプロピルフェニル）-6-（Prop-2-yn-1- Yloxy）キナゾリン-2（1H）-Oneの7つの代謝物の分離と構造の特性評価について説明します。LC-MS-S-S-S-S-S-S-S-S-S-S-S-S-S-S-S-S-S-S-S-S-S-S-S-S-SPEによる胆管カニューレラットの日常的な代謝研究から。代謝産物は、個別のオアシスHLB SPEカラム上の各代謝物のクロマトグラフィーピークの自動トラップを繰り返し繰り返すことにより、胆汁と尿から分離されました。マイクロプロパラティブHPLC/MSは、勾配溶出の移動相として水性酸/アセトニトリル/メタノールを使用して、Xbridge Beh130 C18 HPLCカラムで実行されました。エレクトロスプレーイオン化を使用したLTQ XL線形イオントラップ質量分析計で質量分析検出を実行しました。各代謝物の脱着は、分離シーケンスの後に実行されました。NMRスペクトル（（1）H、（13）C、2D ROESY、HSQC、およびHMBCは、1.7 mm（1）H {（13）C、（15）を備えたBruker Avance III分光計（600 MHzプロトン周波数）で測定されました。）N} Bruker Biospin's TCI Microcryoprobe™。

LC-MS based drug metabolism studies are effective in the optimization stage of drug discovery for rapid partial structure identification of metabolites. However, these studies usually do not provide unambiguous structural characterization of all metabolites, due to the limitations of MS-based structure identification. LC-MS-SPE-NMR is a technique that allows complete structure identification, but is difficult to apply to complex in vivo samples (such as bile collected during in vivo drug metabolism studies) due to the presence, at high concentrations, of interfering endogenous components, and potentially also dosage excipient components (e.g. polyethylene glycols). Here, we describe the isolation and structure characterization of seven metabolites of the drug development candidate 1-isopropyl-4-(4-isopropylphenyl)-6-(prop-2-yn-1-yloxy) quinazolin-2(1H)-one from a routine metabolism study in a bile-duct cannulated rat by LC-MS-SPE. The metabolites were isolated from bile and urine by repeated automatic trapping of the chromatographic peak of each metabolite on separate Oasis HLB SPE columns. The micropreparative HPLC/MS was performed on an XBridge BEH130 C18 HPLC column using aqueous formic acid/acetonitrile/methanol as mobile phase for the gradient elution. Mass spectrometric detection was performed on a LTQ XL linear ion trap mass spectrometer using electrospray ionization. Desorption of each metabolite was performed after the separation sequence. NMR spectra ((1)H, (13)C, 2D ROESY, HSQC and HMBC were measured on a Bruker AVANCE III spectrometer (600 MHz proton frequency) equipped with a 1.7 mm (1)H{(13)C,(15)N} Bruker Biospin's TCI MicroCryoProbe™.