CHO細胞における機能的に強化されたGFPタグ付きトランスフリン受容体のエンドサイトーシス

トランスフリン受容体（TFR）のエンドサイトーシスは、長年にわたってがん治療用の受容体標的貨物配達システムを研究するためのモデルとして機能してきました。in vitroでの送達を標的とするこのTFRを正確に評価し、光学的に測定するために、強化された緑色蛍光タンパク質（EGFP）のタグ付きヒトTFRを備えたCHO細胞株が確立されました。HTFRとEGFPのキメラは、EGFPをHTFRのアミノ末端に融合させることで設計されました。HTFR-EGFPキメラが、CHO細胞上の細胞内蛍光構造を持つ原形質膜上に主に局在していることを実証するデータが提供され、EGFP部分はHTFRのエンドサイトーシス特性に影響しなかった。受容体の内在化は、野生型HTFRを発現するHEPG2細胞の内在化と同様に発生しました。このキメラ受容体の内在化率は、野生型の約81±3％でした。生細胞におけるHTFR-EGFPおよびPE結合抗HTFR MABの時間依存性共局在は、エンドソームを介したmAb受容体複合体の人身売買が、その後、子宮内膜症の後期段階でmAbと受容体の一部の分離を実証しました。CHO-HTFR細胞は、抗HTFR mAb共役ナノ粒子を優先的に取り上げました。このCHO-HTFR細胞株は、トランスフェリンまたはHTFRを標的とするABSと結合した治療薬の細胞内輸送の正確な評価と視覚化のために実行可能になります。

The endocytosis of transferrin receptor (TfR) has served as a model to study the receptor-targeted cargo delivery system for cancer therapy for many years. To accurately evaluate and optically measure this TfR targeting delivery in vitro, a CHO cell line with enhanced green fluorescent protein (EGFP)-tagged human TfR was established. A chimera of the hTfR and EGFP was engineered by fusing EGFP to the amino terminus of hTfR. Data were provided to demonstrate that hTfR-EGFP chimera was predominantly localized on the plasma membrane with some intracellular fluorescent structures on CHO cells and the EGFP moiety did not affect the endocytosis property of hTfR. Receptor internalization occurred similarly to that of HepG2 cells expressing wild-type hTfR. The internalization percentage of this chimeric receptor was about 81 ± 3% of wild type. Time-dependent co-localization of hTfR-EGFP and PE-conjugated anti-hTfR mAb in living cells demonstrated the trafficking of mAb-receptor complexes through the endosomes followed by segregation of part of the mAb and receptor at the late stages of endocytosis. The CHO-hTfR cells preferentially took up anti-hTfR mAb conjugated nanoparticles. This CHO-hTfR cell line makes it feasible for accurate evaluation and visualization of intracellular trafficking of therapeutic agents conjugated with transferrin or Abs targeting the hTfRs.