BALB/CマウスのヒトIgAに対するモノクローナル抗体の開発と特性評価

目的：免疫グロブリンA（IgA）は、ヒト血清の2番目の免疫グロブリンです。モノクローナル抗体には、診断、治療、精製において多くの潜在的な用途があります。ヒトIgAに対する共役モノクローナル抗体は、診断キットで利用されています。 方法：ヒト免疫グロブリンAに対するモノクローナル抗体の産生のために、免疫マウスの脾臓細胞を骨髄腫細胞およびポリエチレングリコール（PEG）としてSP2/0と融合しました。ハイブリドーマ細胞の上清をスクリーニングして、ELISAによる抗体を決定しました。希釈を制限するために適切なクローンが選択されました（L.D）。最終的に、適切なモノクロンを、プリスタンでプライミングされたマウスに腹腔内注入されました。 結果：現在の研究では、175のクローンが得られ、そのうち5つのクローンが希釈を制限するために約3の吸光度値を選択しました。これらのクローンの間に、IgG1サブクラスを備えた3-D5monocloneが適切なものとして選択され、FCSフリーRPMI 1640で再現されました。Invivoの大規模生産のために、適切なクローンをBALB/Cマウスの腹膜に移植され、その速度が決定されました。 結論：モノクローナル抗体はクロマトグラフィーによって精製され、SDS-PAGEで確認され、酵素と共役し、診断キットに使用されました。

OBJECTIVE: Immunoglobulin A (IgA) is the second immunoglobulin in human serum. Monoclonal antibodies have many potential uses in diagnosis, treatment and purification. The conjugated monoclonal antibodies against human IgA are utilized in diagnostic kits. METHODS: For production of monoclonal antibodies against human Immunoglobulin A, spleen cells of the immune mouse were fused with SP2/0 as myeloma cells and Poly Ethylene Glycol (PEG). Supernatant of hybridoma cells was screened to determine the antibody by ELISA. The appropriate clones were selected for limiting dilution (L.D). Ultimately, appropriate monoclone was injected intraperitoneally into the mouse that has been primed with Pristane. RESULTS: In current study, 175 clones were obtained of which 5 clones had absorbance values of about 3 were selected for limiting dilution. Between these clones, 3-D5monoclone with IgG1 subclass was selected as appropriate one and it was reproduced in FCS free RPMI 1640. For large scale production in invivo, the appropriate clone was implanted in the peritoneum of the Balb/c mouse and its titer was determined, which showed 1/100,000 dilution for ascitic fluid, having no cross reactivity with IgM & IgG. CONCLUSIONS: Monoclonal antibody was purified by chromatography, confirmed by SDS-PAGE and then conjugated with enzyme and used for diagnostic kits.