HL-60細胞の免疫回避のメカニズムのエピジェネティックな修正と予備調査

本研究の目的は、組織適合性複合体（MHC）クラスII発現と白血病HL-60細胞の免疫回避に対するクラスIIトランクテクテーター（CIITA）メチル化のエピジェネティックな修飾の効果を調査することでした。HL-60細胞は、さまざまな濃度の5-アズ-2'deoxycytidine（5-aza-CDR）および0.5 µmol/Lスベロイラニリドヒドロキサミン酸（SAHA）で24時間処理し、その後インターフェロンγ（IFN-γ）で刺激して処理しました。48時間。MHCクラスI、IIおよび共刺激分子のmRNAレベルは、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）によって定量化されました。CIITAタンパク質のレベルは、ウエスタンブロット分析によって決定され、CIITAプロモーターIV（CIITAPIV）のCPG島メチル化比は、ビスル酸塩シーケンスPCR（BSP）によって分析されました。MHC Iおよび共刺激分子CD40およびCD80は、対照群およびIFN-γグループ（P <0.05）と比較して、5-Aza-CDR + SAHA + IFN-γ（エピジェネティックグループ）による治療後に有意に増加しました。）。MHCクラスIIとCIITAの発現は、3つのエピジェネティックグループで5-Aza-CDR濃度依存的に復元および増加しました。BSPアッセイの結果は、CIITAPIV CPG部位のメチル化速度がエピジェネティックな修飾の治療とともに減少し、5-AZA-CDR濃度と負の相関があることを示しました。これは、Ciitaタンパク質の負の発現がHL-60細胞でMHC II発現の喪失の主な理由であることを実証しました。本研究の結果は、HL-60細胞の免疫回避のメカニズムを説明するのに役立つかもしれません。

The aim of the present study was to explore the effect of epigenetic modification of class II transactivator (CIITA) methylation on histocompatibility complex (MHC) class II expression and the immune evasion of leukemia HL-60 cells. HL-60 cells were treated with various concentrations of 5-aza-2'deoxycytidine (5-Aza-CdR) and 0.5 µmol/l suberoylanilide hydroxamic acid (SAHA) for 24 h and then stimulated by interferon γ (IFN-γ) for 48 h. The mRNA levels of MHC class I, II and co-stimulatory molecules were quantified by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). The levels of CIITA protein were determined by western blot analysis, and the CpG island methylation ratios in the CIITA promoter IV (CIITApIV) were analyzed by bisulfite-sequencing PCR (BSP). MHC I as well as the co-stimulatory molecules CD40 and CD80 were significantly increased following treatment with 5-Aza-CdR + SAHA + IFN-γ (epigenetic groups) compared with those in the control group and IFN-γ group (P<0.05). The expression of MHC class II and CIITA was restored and increased in an 5-Aza-CdR concentration-dependent manner in the three epigenetic groups. The results of the BSP assay showed that the methylation rate of CIITApIV CpG sites decreased with the treatment of epigenetic modification and negatively correlated to the 5-Aza-CdR concentration. This demonstrated that the negative expression of CIITA protein was the key reason for the loss of MHC II expression in HL-60 cells. The results of the present study may help to illustrate the mechanism of immune evasion in HL-60 cells.