Telmisartanは、AT1R独立メカニズムのSARMを介したヒトIMR-32ニューロン細胞株におけるLPS誘発性神経炎症を減衰させました

目的：この研究の目的は、LPS酔った神経細胞におけるテルミサルタン（TS）の保護的役割を見つけ、可能な神経保護作用メカニズムを解明することでした。 主な方法：TLR4およびAT1R固有のプライマーを設計し、RTPCRで使用して、IMR-32およびNeuro2A細胞株の受容体発現を確認しました。TSの保護効果は、MTTアッセイによってアッセイされました。TSの作用メカニズムは、TLR4特異的アダプタータンパク質SARMおよびMYD88の発現と活性化、NFκB、PPARγ、MAPK P38、C-JNK、ERKのリン酸化NFκBのリン酸化を評価することにより解明されました。選択的PPARγアンタゴニストGW9662を使用して、PPARγの活性化とTLR4媒介NFκB炎症メカニズムとの間のリンクを確認しました。炎症誘発性サイトカインTNFα、IL1β、およびIL-6および抗炎症性サイトカインIL10放出は、ELISAによって測定されました。 主要な発見：IMR-32細胞はTLR4受容体を発現し、Neuro2A細胞はAT1RおよびTLR4受容体の両方を発現しました。TSは、LPS中毒から両方の細胞株を大幅に保護しました。TSは、PPARγおよびSARMタンパク質活性化によるTLR4媒介炎症反応を有意に抑制し、選択的PPARγ拮抗薬GW9662によって効果を著しく逆転させ、SARMを介したPPARγ活性化とTLR4媒介炎症の間のリンクの存在を確認しました。 重要性：LPS酔ったヒトニューロンIMR-32細胞は、TLR4受容体の発現による炎症性媒介神経変性を研究するための優れたin vitroモデルになる可能性があります。私たちの研究では、TSのPPARγ活性化多面的効果が、IMR-32細胞株のSARMアダプタータンパク質を介してLPS誘導TLR4媒介炎症の保護効果の原因であることを強く推奨しています。

AIM: The aim of this study was to find the protective role of Telmisartan (TS) in LPS intoxicated neuronal cells and elucidate the possible neuroprotective mechanism of action. MAIN METHODS: TLR4 and AT1R specific primers were designed and used in rtPCR to confirm the receptor expression in IMR-32 and Neuro2A cell lines. The protective effect of TS was assayed by MTT assay. The mechanism of action of TS was elucidated by assessing the expression and activation of TLR4 specific adaptor proteins SARM and MyD88, phosphorylated NFκB, PPARγ, MAPK p38, c-JNK, ERK by Western blotting. Selective PPARγ antagonist GW9662 was used to confirm the link between PPARγ activation and TLR4 mediated NFκB inflammatory mechanisms. The pro-inflammatory cytokines TNFα, IL1β, and IL-6 and anti-inflammatory cytokine IL10 release were measured by ELISA. KEY FINDINGS: IMR-32 cells expressed TLR4 receptor and Neuro2A cells expressed both AT1R and TLR4 receptors. TS significantly protected both the cell lines from LPS intoxication. TS significantly suppressed the TLR4 mediated inflammatory response by PPARγ and SARM protein activation and the effect was reversed significantly by selective PPARγ antagonist GW9662, confirming the existence of link between PPARγ activation and TLR4 mediated inflammation via SARM. SIGNIFICANCE: LPS intoxicated human neuronal IMR-32 cells can be a good in vitro model to study inflammatory mediated neurodegeneration due to TLR4 receptor expression. Our study strongly recommends that the PPARγ activating pleiotropic effect of TS is responsible for the protective effect in LPS induced TLR4 mediated inflammation via SARM adaptor protein in the IMR-32 cell line.