RFP融合プロテインキナーゼを過剰発現する細胞の溶解物における小分子フォトルミネシセントプローブを使用したFRETベースのスクリーニングアッセイ

過剰発現した赤蛍光タンパク質（TAGRFP）それらのプロテインキナーゼ（PK）と照明腺フォア溶解小分子阻害剤（ARC-photoプロベス）の間のFRETの測定に基づいて、哺乳類細胞の溶解物におけるプロテインキナーゼ阻害剤の特性評価のためにアッセイが開発されました。2種類のアッセイ。1つは、Accedorとして赤蛍光染料を含むARC写真プローブと一緒にTAGRFPを使用して、受容体染色性蛍光剤を使用して、TAGRFPを使用して、テルビウムのクリプチンベースの長い平和光発光供与体で使用されたFRET fessateの測定に使用されていました。アッセイの2番目のバリアントにより、時間分解条件下での測定値のパフォーマンスが可能になり、信号/バックグラウンド比の大幅に高い値をもたらし、アッセイの信頼性がさらに向上しました。

An assay was developed for the characterization of protein kinase inhibitors in lysates of mammalian cells based on the measurement of FRET between overexpressed red fluorescent protein (TagRFP)-fused protein kinases (PKs) and luminophore-labeled small-molecule inhibitors (ARC-Photo probes). Two types of the assay, one using TagRFP as the photoluminescence donor together with ARC-Photo probes containing a red fluorophore dye as acceptor, and the other using TagRFP as the acceptor fluorophore in combination with a terbium cryptate-based long-lifetime photoluminescence donor, were used for FRET-based measurements in lysates of the cells overexpressing TagRFP-fused PKs. The second variant of the assay enabled the performance of the measurements under time-resolved conditions that led to substantially higher values of the signal/background ratio and further improved the reliability of the assay.