鼻咽頭癌細胞アポトーシスに対するsiRNA媒介生存遺伝子サイレンシングの誘導機能

CNE-2 NPCの増殖とアポトーシスの制御に関する小さな干渉RNA（siRNA）と同様に、鼻咽頭癌（NPC）の患者におけるサバイビン遺伝子発現の機能を調べました。免疫組織学的方法、in situハイブリダイゼーション、および逆転写 - ポリメラーゼ連鎖反応技術を使用して、サバイビンタンパク質とmRNAの発現を検出しました。サバイビン遺伝子発現を阻害するsiRNA配列を設計しました。MTTメソッドを使用して、細胞の成長と増殖の制御に関するsiRNAの機能を調べました。siRNAによる細胞アポトーシスの誘導は、フローサイトメトリーによって検査されました。電子顕微鏡を使用して、CNE-2細胞の超微細構造の変化を観察しました。ウエスタンブロッティングを使用して、サバイビン遺伝子発現を検出しました。サバイビンタンパク質は細胞の71.9％で発現し、そのmRNAは細胞の65.6％で発現しました。相対mRNA発現は4.16 x 10（-2）でした。対照群のこれらのデータは、それぞれ23.3、33.3、および4.42 x 10（-4）でした。3つの異なるsiRNA配列を使用したトランスフェクションに続いて、CNE-2細胞におけるサバイビンmRNA発現が減少しました。細胞増殖の阻害とアポトーシスの速度は、siRNA濃度の増加とともに増加しました。ウエスタンブロッティングにより、サバイビン発現の減少が明らかになり、電子顕微鏡が癌細胞の超微細構造の変化が明らかになりました。NPCにおけるサバイビン遺伝子発現は一般に増加しました。siRNAのin vitro転写はCNE-2サバイビン遺伝子発現を減少させ、siRNAの異なる配列はCNE-2細胞の遺伝子発現をさまざまな程度に減少させます。トランスフェクトされたsiRNA3は、CNE-2細胞の増殖を効果的に阻害し、アポトーシスを誘導できます。siRNAを使用した遺伝子サイレンシングは、NPCの新しい治療法を表している可能性があります。

We examined the function of survivin gene expression in patients with nasopharyngeal carcinoma (NPC), as well as small interfering RNA (siRNA) on controlling CNE-2 NPC proliferation and apoptosis. Immunohistological methods, in situ hybridization, and reverse transcription-polymerase chain reaction technique were used to detect survivin protein and mRNA expression. We designed an siRNA sequence to inhibit survivin gene expression. The MTT method was used to examine the function of siRNA on controlling cell growth and proliferation. Induction of cell apoptosis by siRNA was examined by flow cytometry; electron microscopy was used to observe ultrastructure changes in CNE-2 cells. Western blotting was used to detect survivin gene expression. The survivin protein was expressed in 71.9% of cells, while its mRNA was expressed in 65.6% of cells. Relative mRNA expression was 4.16 x 10(-2); these data for the control groups were 23.3, 33.3, and 4.42 x 10(-4), respectively. Following transfection with 3 different siRNA sequences, survivin mRNA expression in CNE-2 cells was decreased. Inhibition of cell proliferation and rate of apoptosis increased with increasing siRNA concentration. Western blotting revealed decreased survivin expression and electron microscopy revealed ultrastructural changes in cancer cells. Survivin gene expression in NPC generally increased. In vitro transcription of siRNA decreased CNE-2 survivin gene expression, and different sequences of siRNA decrease gene expression in CNE-2 cells to varying degrees. Transfected siRNA3 can effectively inhibit CNE-2 cell proliferation and induce apoptosis; gene silencing using siRNA may represent a new treatment for NPC.