B型肝炎ウイルスの遺伝子型付けのための急速な蛍光横方向流量免疫アッセイ

B型肝炎ウイルス（HBV）ジェノタイピングは、慢性B型肝炎（CHB）患者の臨床管理において重要な役割を果たします。ただし、現在の核酸ベースの技術は、高価で、時間がかかり、不便です。ここでは、1段階の蛍光横方向流量免疫測定法（LFIA）に基づいて、新しいDNA非依存性HBVジェノタイピングツールを開発しました。エピトープを標的とする予防接種およびスクリーニング技術を使用して、HBV遺伝子型特異的モノクローナル抗体（MAB）を開発しました。これらのMABは、HBVジェノタイピングのために一致したスキャン照度（GT-LFIAと呼ばれる）を備えたマルチテストLFIAを開発するために使用されました。この新しいアッセイのパフォーマンスは、よく特徴付けられた臨床コホートで慎重に評価されました。前処理のない単一テストでHBV遺伝子型A、B、C、およびDを特異的に区別できるGT-LFIAは、4つの遺伝子型固有のMABを使用して成功裏に開発されました。HBV遺伝子型A、B、C、およびDのGT-LFIAの検出限界は、それぞれ2.5-10.0 IU HBV表面抗原/mLでした。456人のCHB患者の血清の中で、439人（96.3％; 95％信頼区間（CI）、94.1-97.8％）は、GT-LFIAおよび437（99.5％; 95％CI、98.4-99.9％）によって遺伝子型分化可能でした。ウイルスゲノムシーケンスと一致していました。ヌクレオ（T）IDEアナログ療法を受けている21人の患者では、HBV DNAが検出できず、DNA依存性ジェノタイピングに適用されなかった治療終了標本の場合、GT-LFIAは、前処理で得られたものと一致するジェノタイピング結果を提示しました。ウイルスゲノムシーケンスおよびGT-LFIAによる標本。結論として、新しいGT-LFIAは、特にHBV DNAレベルが低いまたは検出されない患者において、HBVジェノタイピングの差異のための便利で高速で信頼できるツールです。

Hepatitis B virus (HBV) genotyping plays an important role in the clinical management of chronic hepatitis B (CHB) patients. However, the current nucleic acid based techniques are expensive, time-consuming, and inconvenient. Here, we developed a novel DNA-independent HBV genotyping tool based on a one-step fluorescent lateral flow immunoassay (LFIA). Epitope-targeting immunization and screening techniques were used to develop HBV genotype specific monoclonal antibodies (mAbs). These mAbs were used to develop a multitest LFIA with a matched scanning luminoscope for HBV genotyping (named the GT-LFIA). The performance of this novel assay was carefully evaluated in well-characterized clinical cohorts. The GT-LFIA, which can specifically differentiate HBV genotypes A, B, C, and D in a pretreatment-free single test, was successfully developed using four genotype specific mAbs. The detection limits of the GT-LFIA for HBV genotypes A, B, C, and D were 2.5-10.0 IU HBV surface antigen/mL, respectively. Among the sera from 456 CHB patients, 439 (96.3%; 95% confidence interval (CI), 94.1-97.8%) were genotype-differentiable by the GT-LFIA and 437 (99.5%; 95% CI, 98.4-99.9%) were consistent with viral genome sequencing. In the 21 patients receiving nucleos(t)ide analogue therapy, for end-of-treatment specimens that were HBV DNA undetectable and were not applicable for DNA-dependent genotyping, the GT-LFIA presented genotyping results that were consistent with those obtained in pretreatment specimens by viral genome sequencing and the GT-LFIA. In conclusion, the novel GT-LFIA is a convenient, fast, and reliable tool for differential HBV genotyping, especially in patients with low or undetectable HBV DNA levels.