生細胞のEGFP光安定性に対する細胞成長条件と媒体組成の影響

光安定性は、蛍光タンパク質の重要な特徴です。最近、生細胞の緑色蛍光タンパク質（GFP）光退色は、中程度の組成の変化によって抑制されることが実証されました。ここでは、HAMのF12培地が、生細胞の蛍光顕微鏡中に非常に高強化されたGFP（EGFP）光安定性を提供することを示します。HAMのF12培地のこの特性は、リボフラビンとピリドキシンの濃度の減少、およびDMEMと比較してFESO4、シアノコバラミン、リポ酸、ヒポキサンチン、およびチミジンの濃度の増加に関連しています。また、EGFP光退色の速度は、細胞密度や血清の濃度などの細胞成長条件に強く依存することがわかりました。イメージング培地組成と細胞の生理学的状態の両方が、蛍光タンパク質の光安定性に強く影響する可能性があると結論付けています。したがって、蛍光タンパク質の光粘着性の正確な比較は、同一の細胞成長条件と培地での並べ替えでのみ実行する必要があります。

Photostability is a key characteristic of fluorescent proteins. It was recently demonstrated that green fluorescent protein (GFP) photobleaching in live cells can be suppressed by changes in medium composition. Here we show that Ham's F12 medium provides very high enhanced GFP (EGFP) photostability during fluorescence microscopy of live cells. This property of Ham's F12 medium is associated with decreased concentrations of riboflavin and pyridoxine, and increased concentrations of FeSO4, cyanocobalamine, lipoic acid, hypoxanthine, and thymidine compared with DMEM. We also found that the rate of EGFP photobleaching strongly depends on cell growth conditions such as cell density and the concentration of serum. We conclude that both imaging medium composition and the physiological state of the cells can strongly affect the photostability of fluorescent proteins. Thus, accurate comparison of the photostabilities of fluorescent proteins should be performed only in side-by-side analysis in identical cell growth conditions and media.