異なる胚の起源からの鶏肉の長期生殖細胞のin vitro生成と特性評価

原始胚細胞（PGC）は、分化した生殖細胞の前駆体です。ステージX（EG＆K）胚のエピブラストに位置するPGCは、発達から48時間から56時間以内に胚の三日月に前方に移動し、血管系を介してgonadal生殖細胞になります（GGCSになります。）。（1）鶏肉芽球細胞（IX-XII段階で）に由来するin vitroの長期培養PGCの基本的な特性を生成、比較、決定することを目指しています。（2）2日前の胚の鶏の血液（ステージ14-17ハンバーガーハミルトン[HH]）;（3）5〜6日齢の胚の雄gonadから採取した長期培養go骨細胞（ステージ29〜30 HH）。線維芽細胞成長因子の存在下で、鶏肉芽球細胞は長期に増殖し、小さい丸いアルカリホスファターゼ陽性細胞クラスターを生成することができます。分子の特性評価は、これらの選択および増幅されたクラスターが、CPOUV（多能性関連マーカー）、NR6A1/GCNF、およびDDX4/CVH（生殖細胞特異的遺伝子）を発現するため、PGC様細胞プロファイルを示すことを示しています。それぞれ14〜17 HHおよび29〜30 HHで胚性血液と生殖腺から得られた鶏肉PGCとGGCの両方が、長期の生殖細胞培養を生成し、in vitroで周期的に酸シフと積極的に反応します。免疫化学分析により、これらの細胞株は、抗SSEA-1、抗EMA-1、抗CVH、抗β1-インテグリン、および抗シーカム抗体によって特異的に認識されていることが明らかになりました。周囲の細胞の存在は、GGCのニッチプロセスへのより強い依存性を示唆する可能性があります。この研究で使用された特定のマーカーに対する2つの異なるソースから得られた鶏の胚生殖細胞の反応性は、培養を通じて変化しませんでした。結論として、鶏肉PGCおよびGGCに特有の形態学的解析は、in vitro鶏生菌細胞の長期培養された培養の迅速かつ信頼性の高い特性評価にさらに寄与します。

Primordial germ cells (PGCs) are the precursors of differentiated germ cells. Located in the epiblast of a stage X (EG&K) embryo, the PGCs translocate anteriorly to the germinal crescent and migrate, within 48 to 56 hours of development, through the blood vascular system to the germinal ridges where they become the gonadal germ cells (GGCs). We aim to generate, compare, and determine the basic characters of the in vitro long-term cultured PGCs derived from (1) the chicken blastodermal cells (at stages IX-XII); (2) the chicken blood of a 2-day old embryo (stages 14-17 Hamburger Hamilton [HH]); and (3) the long-term cultured gonocytes taken from male gonads of a 5- to 6-day-old embryo (stages 29-30 HH). In presence of fibroblast growth factor, chicken blastodermal cells are able to long-term proliferate and generate small, round, alkaline phosphatase-positive cell clusters. Molecular characterization shows that these selected and amplified clusters show a PGC-like cell profile, as they express cPOUV (a pluripotent-associated marker), NR6A1/GCNF and DDX4/CVH (germ cell-specific genes). Both chicken PGCs and GGCs, obtained from embryonic blood and gonads, at 14 to 17 HH and 29 to 30 HH, respectively, generate long-term germ cell cultures and positively react in vitro to periodic acid-Schiff. Immunochemical analyses reveal that these cell lines are specifically recognized by anti-SSEA-1, anti-EMA-1, anti-CVH, anti-β1-integrin, and anti-CEACAM antibodies. The presence of surrounding cells may suggest a stronger dependency toward the niche process for the GGCs. The reactivity of chicken embryonic germ cells obtained from the two different sources to the specific markers used in this study was not altered through the culture. In conclusion, the morphologic analysis specific for chicken PGCs and GGCs will further contribute to quick and reliable characterization of long-term cultured in vitro chicken germ cells.