ボツリヌス神経毒の特性評価免疫誘導濃縮および液体クロマトグラフィータンデム質量分析によるサブタイプAサブタイプ

ボツリヌス神経毒（BONT）は、免疫学的特性に基づいて7つの毒素型に分割され、各毒素型にはアミノ酸配列に従っていくつかのサブタイプが含まれています。ここでは、粗培養上清、食物、環境サンプルを含む複雑なマトリックスのBont/Aサブタイプを識別できる質量分析法を設計しました。サブタイプBONT/A1からA3、およびBONT/A5からA8へのサブタイプに固有のペプチドが同定されました。この方法は、複数の反応モニタリング（MRM）モードでトリプル四重極質量分析計（QQQ）に液体クロマトグラフィータンデム質量分析（LC-MS/MS）に続くBont/A L鎖に特異的な抗体を備えた免疫誘引ステップで構成されています。BONT/Aサブタイプは、培養上清および水道水またはオレンジジュースのサンプルで、20〜150のマウス致死量（MLD）を検出し、血清サンプルの感度が低いことで正しく識別されました。

Botulinum neurotoxins (BoNT) are divided into seven toxinotypes based on their immunological properties and each toxinotype contains several subtypes according to their amino acid sequences. Here, we designed a mass spectrometry method able to identify BoNT/A subtypes in complex matrices including crude culture supernatants, food, and environmental samples. Peptides from BoNT light chain (L) specific to the subtypes BoNT/A1 to A3 and BoNT/A5 to A8 were identified. The method consists of an immunocapture step with antibodies specific to BoNT/A L chains followed by liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) on a triple quadrupole mass spectrometer (QqQ) in multiple reaction monitoring (MRM) mode. BoNT/A subtypes were correctly identified in culture supernatants and in tap water or orange juice samples with a limit of detection of 20 to 150 mouse lethal doses (MLD) and with a lower sensitivity in serum samples.