七面鳥のセレノプロテイン転写産物のクローニング、シーケンス、および発現（Meleagris gallopavo）

雄の七面鳥の養鶏の最小SE要件は、肝臓と砂糖のグルタチオンペルオキシダーゼ-4（GPX4）およびGPX1活性に基づいてげっ歯類にある要件よりも0.3μgのSE/g - 3倍高くなっています。さらに、七面鳥の肝臓GPX4活性は10倍高く、GPX1活性はラットよりも10倍低く、GPX1およびGPX4 mRNAレベルの両方がSE欠乏によって劇的にダウンレギュレートされています。現在、NCBIデータベース内のすべての注釈付きトルコセレノプロテイン転写産物とタンパク質の配列は、「予測」のみです。したがって、七面鳥のセレノプロテイントランスクリプトーム全体のクローニングとシーケンスを開始し、七面鳥のセレノプロテイン転写産物の発現を実証し、完全なセレノプロテオームのSE調節を調査するためのツールを開発しました。総RNAは、SEに劣った成人Tomターキーの6つの組織から分離され、逆転写cDNAライブラリーの調製に使用されました。PCRプライマーは、最初は鶏肉、げっ歯類、ブタ、ウシ、およびヒトシーケンスに基づいて設計され、後に七面鳥の散弾銃のクローニングシーケンスに基づいていました。ここでは、9つのセレノプロテインの完全な転写配列のクローニングと、22 3'utrsのセキシス要素を含む15の追加セレノプロテインの3'utr部分、および19セレノプロテインのコーディング領域内のインフレームSec（UGA）コドンを含む、インクラームの秒（UGA）コドンを含む、frame sec（uga）コドンを報告します。SEPP1の12秒のコドン。さらに、七面鳥のゲノムのショットガンクローニングからの2つのコンティグ間のギャップをシーケンスし、七面鳥のSec-TRNAの欠落シーケンスを見つけました。RTPCRを使用して、6組織の相対転写発現を決定しました。GPX3の発現は腎臓を除くすべての組織で高く、GPX1の発現は腎臓で高く、SEPW1発現は心臓、砂利、筋肉が高く、肝臓ではSelu発現が高かった。哺乳類には見られないセレノプロテインであるSEPP2は、肝臓で高度に発現していましたが、他の組織では発現しませんでした。要約すると、24個のセレノプロテインの転写産物は、予測されるだけでなく、七面鳥で発現しています。

The minimum Se requirement for male turkey poults is 0.3 μg Se/g--three times higher than requirements found in rodents--based on liver and gizzard glutathione peroxidase-4 (GPX4) and GPX1 activities. In addition, turkey liver GPX4 activity is 10-fold higher and GPX1 activity is 10-fold lower than in rats, and both GPX1 and GPX4 mRNA levels are dramatically down-regulated by Se deficiency. Currently, the sequences of all annotated turkey selenoprotein transcripts and proteins in the NCBI database are only "predicted." Thus we initiated cloning and sequencing of the full turkey selenoprotein transcriptome to demonstrate expression of selenoprotein transcripts in the turkey, and to develop tools to investigate Se regulation of the full selenoproteome. Total RNA was isolated from six tissues of Se-adequate adult tom turkeys, and used to prepare reverse-transcription cDNA libraries. PCR primers were designed, based initially on chicken, rodent, porcine, bovine and human sequences and later on turkey shotgun cloning sequences. We report here the cloning of full transcript sequences for 9 selenoproteins, and 3'UTR portions for 15 additional selenoproteins, which include SECIS elements in 22 3'UTRs, and in-frame Sec (UGA) codons within coding regions of 19 selenoproteins, including 12 Sec codons in SEPP1. In addition, we sequenced the gap between two contigs from the shotgun cloning of the turkey genome, and found the missing sequence for the turkey Sec-tRNA. RTPCR was used to determine the relative transcript expression in 6 tissues. GPX3 expression was high in all tissues except kidney, GPX1 expression was high in kidney, SEPW1 expression was high in heart, gizzard and muscle, and SELU expression was high in liver. SEPP2, a selenoprotein not found in mammals, was highly expressed in liver but not in other tissues. In summary, transcripts for 24 selenoproteins are expressed in the turkey, not just predicted.