Zymoseptoria triticiのスピッツェンケルパーおよびエキソサイトーシスの蛍光マーカー

真菌菌糸は、先端成長によって基質に侵入する高度に偏光のある細胞です。植物の病原性真菌では、宿主の侵入には菌糸の成長が不可欠です。これにより、極性因子と分泌調節因子が、新しい殺菌剤の新しいターゲットの潜在的な潜在的なものになります。偏光には、尖端のスピッツェンケルパーへの分泌小胞の送達が必要であり、拡大する細胞先端で偏光エキソサイトーシスが続きます。ここでは、小麦Zymoseptoria triticiの菌糸における頂端Spitzenkörperとエキソサイトーシスの頂端部位を視覚化するための蛍光マーカーを導入します。緑色の蛍光タンパク質を小さなGTPase ZTSEC4、ミオシン軽鎖ZTMLC1、および小さなGTPase Ztrab11に融合し、Hyphal Apexの染料FM4-64と融合タンパク質を共局在させ、マーカーがZ.Tritici。さらに、GFP融合をエキソシストタンパク質Ztexo70、Polarisomeタンパク質ZTSPA2に局在させます。Ascomycete Neurospora Crassaの結果と一致して、これらのマーカーは菌糸先の原形質膜の近くに局在し、FM4-64と部分的にのみ共局在しました。したがって、これらの蛍光マーカーは、Z。triticiの変異体の表現型分析を可能にする有用な分子ツールです。これらのツールは、小麦のSTB感染を制御するための私たちの探求における新しい研究の開発に役立ちます。

Fungal hyphae are highly polarized cells that invade their substrate by tip growth. In plant pathogenic fungi, hyphal growth is essential for host invasion. This makes polarity factors and secretion regulators potential new targets for novel fungicides. Polarization requires delivery of secretory vesicles to the apical Spitzenkörper, followed by polarized exocytosis at the expanding cell tip. Here, we introduce fluorescent markers to visualize the apical Spitzenkörper and the apical site of exocytosis in hyphae of the wheat pathogen Zymoseptoria tritici. We fused green fluorescent protein to the small GTPase ZtSec4, the myosin light chain ZtMlc1 and the small GTPase ZtRab11 and co-localize the fusion proteins with the dye FM4-64 in the hyphal apex, suggesting that the markers label the hyphal Spitzenkörper in Z. tritici. In addition, we localize GFP-fusions to the exocyst protein ZtExo70, the polarisome protein ZtSpa2. Consistent with results in the ascomycete Neurospora crassa, these markers did localize near the plasma membrane at the hyphal tip and only partially co-localize with FM4-64. Thus, these fluorescent markers are useful molecular tools that allow phenotypic analysis of mutants in Z. tritici. These tools will help develop new avenues of research in our quest to control STB infection in wheat.