ガレリーナマージータにおける（15）N標識α-アマニチンの産生

α-アマニチンは、世界中の致命的なキノコ中毒の大部分を占める致命的なアマニタキノコの主要な因果関係者です。また、標的の研究のための重要な生化学的ツールであるRNAポリメラーゼIIです。この二環式ペプチドの商用供給は、野生から収集されたデスキャップマッシュルームであるアマニタファロイドから来ています。同位体標識アマニチンは臨床的および法医学的応用に役立つ可能性がありますが、α-アマニチンは化学的に合成されておらず、A。phalloidesは人工媒体で培養できません。培養中にα-アマニチンを成長および産生する無関係な幹栄養マッシュルームであるGalerina Marginataを使用して、（15）nitrogen源として（15）nを含む成長媒体を使用して（15）N標識α-アマニチンを生成する方法を説明します。成功の鍵は、（15）「ガラスビーズ支援成熟」と呼ばれる新しい方法を介して（15）N濃縮酵母抽出物を準備することでした。標識酵母抽出物と（15）nh4clの存在下で、α-アマニチンが97％を超える同位体濃縮で産生されました。標識生成物は、HPLC、高解像度質量分析、およびNMRによって確認されました。

α-Amanitin is the major causal constituent of deadly Amanita mushrooms that account for the majority of fatal mushroom poisonings worldwide. It is also an important biochemical tool for the study of its target, RNA polymerase II. The commercial supply of this bicyclic peptide comes from Amanita phalloides, the death cap mushroom, which is collected from the wild. Isotopically labeled amanitin could be useful for clinical and forensic applications, but α-amanitin has not been chemically synthesized and A. phalloides cannot be cultured on artificial medium. Using Galerina marginata, an unrelated saprotrophic mushroom that grows and produces α-amanitin in culture, we describe a method for producing (15)N-labeled α-amanitin using growth media containing (15)N as sole nitrogen source. A key to success was preparing (15)N-enriched yeast extract via a novel method designated "glass bead-assisted maturation." In the presence of the labeled yeast extract and (15)N-NH4Cl, α-amanitin was produced with >97% isotope enrichment. The labeled product was confirmed by HPLC, high-resolution mass spectrometry, and NMR.