アルカリ性pHにおける疎水性相互作用クロマトグラフィー

疎水性相互作用クロマトグラフィーは、タンパク質とリガンド間の疎水性相互作用を増加させるために強力な塩漬け塩に依存する非常に強力なタンパク質精製技術です。硫酸アンモニウムは、この目的で最も一般的に使用される塩ですが、非常にアルカリ性pHでは使用することはできません。したがって、グルタミン酸モノソジウムは、pH 9.5での疎水性相互作用クロマトグラフィーの塩としてテストされました。リボヌクレアーゼA、卵形、およびベータラクトグロブリンを2 mのグルタミン酸中のフェニルスーパーノカラムに個別に適用した場合、3つのタンパク質すべてがカラムに結合し、その後塩濃度を減らすことで溶出することができます。この塩を使用して、商業的に得られたベータラクトグロブリンを本物のタンパク質と汚染物質に分離し、卵形とベータラクトグロブリンの混合物から個々のタンパク質を精製することができました。これらの結果は、グルタミン酸モノソジウムが疎水性相互作用クロマトグラフィーにとって有用な塩であることを示しています。グアニジンと硫酸ナトリウムとアスパラギン酸ナトリウムも同じpHで検査され、それらが検査されたタンパク質の結合と溶出をもたらしたことを示しました。

Hydrophobic interaction chromatography is a very powerful protein purification technique which is dependent on strong salting-out salts to increase the hydrophobic interactions between the protein and the ligand. Ammonium sulfate is the salt most commonly used for this purpose, but it cannot be used at very alkaline pH. Monosodium glutamate was therefore tested as a salt for hydrophobic interaction chromatography at pH 9.5. When ribonuclease A, ovalbumin, and beta-lactoglobulin were individually applied to a phenyl superose column in 2 M monosodium glutamate, all three proteins bound to the column and could be subsequently eluted by decreasing the salt concentration. Using this salt, it was possible to separate commercially obtained beta-lactoglobulin into authentic protein and contaminants and to purify the individual proteins from a mixture of ovalbumin and beta-lactoglobulin. These results demonstrate that monosodium glutamate is a useful salt for hydrophobic interaction chromatography. Guanidine and sodium sulfate and sodium aspartate were also examined at the same pH, demonstrating that they also resulted in the binding and elution of the proteins examined.