ワイドフィールドOCTとSLOと組み合わせた適応型オプティックスロイメージングにより、マウス網膜の蛍光細胞の正確な3D局在化が可能になります

マウス網膜の絶妙な細胞内解像度イメージングを達成するために、最近、レーザー眼鏡検査（AO-SLO）をスキャンする適応光学式スキャンが使用されました。波面検知ベースのAOは通常、視野を数度の視角に制限します。その結果、AO-SLOデータと大規模な網膜構造と細胞パターンとの関係を評価するのは難しい場合があります。網膜血管系は、in vivoイメージング中に細胞と構造を配置できる大規模な3Dマップを提供します。位相分散OCT（PV-OCT）は、ラベルのない方法で近赤外光で血管を効率的に画像化でき、高精度で3D血管再建を可能にします。ワイドフィールドPV-OCTとSLOイメージングをAO-SLO反射と蛍光イメージングと組み合わせて、網膜層内の2種類の蛍光細胞を局在させました。GFP発現ミクログリア、網膜の居住マクロファージ、およびGFP発現コーン光受容細胞。マウスの高解像度網膜イメージングのために設計された反射的なAo-Slo網膜イメージングシステムを詳細に説明します。この機器の光学性能は、他の最先端のAOベースのマウス網膜イメージングシステムと比較されます。新しいAO計装の空間的および時間的解像度は、血流速度分析を含む網膜毛細血管の血管造影で特徴付けられました。ミクログリアおよび円錐光受容体の深さ分解されたAo-Slo蛍光画像は、微小血管系およびその他の構造の469 nmおよび663 nmの反射画像と並行して視覚化されます。新しい機器の追加アプリケーションについて説明します。

Adaptive optics scanning laser ophthalmoscopy (AO-SLO) has recently been used to achieve exquisite subcellular resolution imaging of the mouse retina. Wavefront sensing-based AO typically restricts the field of view to a few degrees of visual angle. As a consequence the relationship between AO-SLO data and larger scale retinal structures and cellular patterns can be difficult to assess. The retinal vasculature affords a large-scale 3D map on which cells and structures can be located during in vivo imaging. Phase-variance OCT (pv-OCT) can efficiently image the vasculature with near-infrared light in a label-free manner, allowing 3D vascular reconstruction with high precision. We combined widefield pv-OCT and SLO imaging with AO-SLO reflection and fluorescence imaging to localize two types of fluorescent cells within the retinal layers: GFP-expressing microglia, the resident macrophages of the retina, and GFP-expressing cone photoreceptor cells. We describe in detail a reflective afocal AO-SLO retinal imaging system designed for high resolution retinal imaging in mice. The optical performance of this instrument is compared to other state-of-the-art AO-based mouse retinal imaging systems. The spatial and temporal resolution of the new AO instrumentation was characterized with angiography of retinal capillaries, including blood-flow velocity analysis. Depth-resolved AO-SLO fluorescent images of microglia and cone photoreceptors are visualized in parallel with 469 nm and 663 nm reflectance images of the microvasculature and other structures. Additional applications of the new instrumentation are discussed.