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抗糖尿病薬のメトホルミンとシタグリプチン、および同じヒト乾燥血液スポット（DBS）の腎クリアランスマーカークレアチニンの分析のために、HPLC/UVおよびLC-ESI-MS/MSを使用した2つの液体クロマトグラフィー法が開発および検証されています。40μlの血液の正確な体積をサンプリング紙に発見し、10％ギ酸を含む90％アセトニトリルを使用して抽出しました。新しい方法は、選択的で正確で正確であることが示されました。検証済みの範囲は、メトホルミンで0.2〜5μg/ml、クレアチニンでは1.5-15μg/ml、シタグリプチンでは3-500Ng/mLでした。DBSの薬物分析は、典型的に使用される血漿レベルとは対照的に全血濃度を決定するため、ヒト血漿と血液細胞の分配比であるC（P）/C（BC）はin vitroで解明され、両方の化合物の分布のコンパートメントとしての血液細胞の重要性に関する洞察を得ることができました。C（P）/C（BC）は、メトホルミンでは4.65±0.73、シタグリプチンでは5.58±0.98であることがわかりました。赤血球中のメトホルミンの蓄積はすでに知られていましたが、シタグリプチンがヒトの血液細胞に分布する最初の証拠を提示しました。分析方法は、メトホルミンとシタグリプチンの組み合わせを定期的に服用している2人の糖尿病患者の本物の毛細血管サンプルにも成功裏に適用されました。両方のサンプルにより、それぞれの化合物の定量化の下限をはるかに上回る分析物トラフ濃度が明らかになりました。したがって、本研究は、患者のクレアチニン濃度に関連するメトホルミンとシタグリプチンのDBS分析の方法論的基盤を提供します。
抗糖尿病薬のメトホルミンとシタグリプチン、および同じヒト乾燥血液スポット（DBS）の腎クリアランスマーカークレアチニンの分析のために、HPLC/UVおよびLC-ESI-MS/MSを使用した2つの液体クロマトグラフィー法が開発および検証されています。40μlの血液の正確な体積をサンプリング紙に発見し、10％ギ酸を含む90％アセトニトリルを使用して抽出しました。新しい方法は、選択的で正確で正確であることが示されました。検証済みの範囲は、メトホルミンで0.2〜5μg/ml、クレアチニンでは1.5-15μg/ml、シタグリプチンでは3-500Ng/mLでした。DBSの薬物分析は、典型的に使用される血漿レベルとは対照的に全血濃度を決定するため、ヒト血漿と血液細胞の分配比であるC（P）/C（BC）はin vitroで解明され、両方の化合物の分布のコンパートメントとしての血液細胞の重要性に関する洞察を得ることができました。C（P）/C（BC）は、メトホルミンでは4.65±0.73、シタグリプチンでは5.58±0.98であることがわかりました。赤血球中のメトホルミンの蓄積はすでに知られていましたが、シタグリプチンがヒトの血液細胞に分布する最初の証拠を提示しました。分析方法は、メトホルミンとシタグリプチンの組み合わせを定期的に服用している2人の糖尿病患者の本物の毛細血管サンプルにも成功裏に適用されました。両方のサンプルにより、それぞれの化合物の定量化の下限をはるかに上回る分析物トラフ濃度が明らかになりました。したがって、本研究は、患者のクレアチニン濃度に関連するメトホルミンとシタグリプチンのDBS分析の方法論的基盤を提供します。
For analysis of the anti-diabetic drugs metformin and sitagliptin and the renal clearance marker creatinine in the same human dried blood spot (DBS) extract two liquid chromatography methods employing HPLC/UV and LC-ESI-MS/MS have been developed and validated. An accurate volume of 40μL blood was spotted on a sampling paper which was extracted using 90% acetonitrile with 10% formic acid. The new methods were shown to be selective, accurate and precise. The validated ranges were 0.2-5μg/mL for metformin, 1.5-15μg/mL for creatinine and 3-500ng/mL for sitagliptin. Since drug analysis in DBS determines whole blood concentrations as opposed to the typically used plasma levels the partition ratios between human plasma and blood cells, c(P)/c(BC), were elucidated in vitro to gain insight into the significance of blood cells as compartment of distribution for both compounds. The c(P)/c(BC) was found to be 4.65±0.73 for metformin and 5.58±0.98 for sitagliptin. While an accumulation of metformin in erythrocytes was already known we now present the first evidence that sitagliptin distributes into human blood cells. The analytical methods were also successfully applied to authentic capillary blood samples from two diabetic patients regularly taking a combination of metformin and sitagliptin. Both samples revealed analyte trough concentrations well above the lower limit of quantification of the respective compounds. Therefore, the present study offers a methodological basis for the DBS analysis of metformin and sitagliptin in relation to the patients' creatinine concentration.
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