クラスリンを介した細胞内輸送へのepsinrとガドキンの貢献

クラスリンを介した細胞内の人身売買に関与するタンパク質のほとんどの正確な機能は不明です。そのような2つのタンパク質、EpsinrとGadkinを調査し、ノックサイドウェイ方法を使用して、ミトコンドリアに閉じ込めて利用可能なプールからタンパク質を急速に枯渇させました。EPSINRはN-エチルメレイミド感受性因子付着タンパク質受容体（SNARE）特異的アダプターであることが知られていますが、EPSINRノックサイドウェイは、細胞内クラスリンコーティングされた小胞（CCV）の全集団の生成をブロックし、よりグローバルな機能を示唆しました。EPSINRノックサイドウェイデータを使用して、すべての主要な細胞内CCVタンパク質のコピー数を推定することができました。小胞の両側は密に覆われており、CCVが分子混雑によって貨物を並べ替えることを示しています。ミトコンドリアへのガドキンのトラップは、細胞内CCVの産生もブロックしましたが、別のメカニズムによって：小胞はミトコンドリアに架橋され、細胞周辺に向かって引き出されました。両方の表現型は、細胞内CCV形成の調節に関する新しい洞察を提供しますが、これはより従来のアプローチを使用して見つかりませんでした。

The precise functions of most of the proteins that participate in clathrin-mediated intracellular trafficking are unknown. We investigated two such proteins, epsinR and gadkin, using the knocksideways method, which rapidly depletes proteins from the available pool by trapping them onto mitochondria. Although epsinR is known to be an N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor (SNARE)-specific adaptor, the epsinR knocksideways blocked the production of the entire population of intracellular clathrin-coated vesicles (CCVs), suggesting a more global function. Using the epsinR knocksideways data, we were able to estimate the copy number of all major intracellular CCV proteins. Both sides of the vesicle are densely covered, indicating that CCVs sort their cargo by molecular crowding. Trapping of gadkin onto mitochondria also blocked the production of intracellular CCVs but by a different mechanism: vesicles became cross-linked to mitochondria and pulled out toward the cell periphery. Both phenotypes provide new insights into the regulation of intracellular CCV formation, which could not have been found using more conventional approaches.