MRC-5線維芽細胞条件の培地は、肝細胞癌の浸潤、移動、増殖、およびアポトーシスを調節する複数の経路に影響を与えます

背景：腫瘍微小環境の重要な成分である癌関連線維芽細胞（CAF）は、上皮間葉移行（EMT）の開始を通じて腫瘍細胞の浸潤と移動を促進することができます。MRC-5線維芽細胞は、アルファスムースの筋肉アクチンを発現するCAFの1つです。MRC-5線維芽細胞によって条件付けられた培地は、乳癌細胞の運動性と浸潤を刺激することが確認されています。しかし、肝細胞癌（HCC）におけるその役割はそれほど明確ではありません。私たちの研究の目的は、HCCに対するMRC-5-cmの効果を調査し、基礎となるメカニズムを調査することでした。 方法と結果：テクニックの組み合わせを使用して、HCCにおけるMRC-5-CMの役割を評価しました。MRC-5-cmがBEL-7402およびMHCC-LM3細胞株で非古典的なEMTを誘導すると判断しました。非古典的なEMTの開始は、主にα-、β-カテニン、p120カテニン、E-カドヘリン、およびN-カドヘリンの典型的な再分布を介して、典型的なEMT関連転写因子のアップレギュレーションではありません（すなわち、すなわち、カタツムリ、Twist1、Zeb-1およびZeb2）。また、MRC-5-CMは、α6、β3、β4、β4、β7インテグリン/FAK経路の活性化とMMP2のアップレギュレーションを介して間葉系移動モードにおけるBEL-7402およびMHCC-LM3細胞の移動と浸潤の両方を増強することがわかりました。フローサイトメトリー分析では、MRC-5-cmがS相細胞の付随的な減少を伴うBEL-7402細胞でG1相停止を誘導したことが示されました。対照的に、MRC-5-cmは、G2/M相の細胞が付随するMHCC-LM3細胞でS期停止を誘導しました。MHCC-5-CMは、MHCC-LM3細胞のアポトーシスを誘導しながら、BEL-7402細胞のアポトーシスも阻害しました。 結論：集合的に、MRC-5-CMは、α-、β-カテニン、p120カテニン、E-カドヘリン、およびN-カドヘリンの再分布を含む、非古典的EMTの開始によるHCC細胞の運動性と侵襲性を促進しました。インテグリン/FAK経路の経路、およびMMP2のアップレギュレーション。したがって、MRC-5-CMは、サイクリン、サイクリン依存性キナーゼ（CDK）、CDK阻害剤（CKI）、Bcl-2ファミリータンパク質、およびその他の未知のメカノセンサーを調節することにより、BEL-7402およびMHCC-LM3細胞の生存率に異なる役割を及ぼしました。

BACKGROUND: Carcinoma associated fibroblasts (CAFs), an important component of tumor microenvironment, are capable of enhancing tumor cells invasion and migration through initiation of epithelial-mesenchymal transition (EMT). MRC-5 fibroblasts are one of the CAFs expressing alpha-smooth muscle actin. It is ascertained that medium conditioned by MRC-5 fibroblasts stimulate motility and invasion of breast cancer cells. However, its role in hepatocellular carcinoma (HCC) is less clear. The aim of our study was to investigate the effect of MRC-5-CM on HCC and explore the underlying mechanisms. METHODS AND RESULTS: Using a combination of techniques, the role of MRC-5-CM in HCC was evaluated. We determined that MRC-5-CM induced the non-classical EMT in Bel-7402 and MHCC-LM3 cell lines. Initiation of the non-classical EMT was mainly via quintessential redistribution of α-, β- and γ-catenin, P120 catenin, E-cadherin, and N-cadherin, rather than up-regulation of typical EMT-related transcription factors (i.e., Snail, Twist1, ZEB-1 and ZEB2). We also found that MRC-5-CM potentiated both the migration and invasion of Bel-7402 and MHCC-LM3 cells in mesenchymal movement mode through activation of the α6, β3, β4, β7 integrin/FAK pathway and upregulation of MMP2. The flow cytometric analysis showed that MRC-5-CM induced G1 phase arrest in Bel-7402 cells with a concomitant reduction of S phase cells. In contrast, MRC-5-CM induced S phase arrest in MHCC-LM3 cells with a concomitant reduction of cells in the G2/M phase. MRC-5-CM also inhibited apoptosis in Bel-7402 cells while inducing apoptosis in MHCC-LM3 cells. CONCLUSION: Collectively, MRC-5-CM promoted HCC cell motility and invasiveness through initiation of the non-classical EMT, including redistribution of α-, β- and γ-catenin, P120 catenin, E-cadherin, and N-cadherin, activation of the integrin/FAK pathway, and upregulation of MMP2. Hence, MRC-5-CM exerted distinct roles in Bel-7402 and MHCC-LM3 cell viability by regulating cyclins, cyclin dependent kinases (CDKs), CDK inhibitors (CKIs), Bcl-2 family proteins and other unknown mechanosensors.