His-TAG抗体によって検出された内因性の「非特異的」タンパク質は、ヒト転写調節因子YY1です

ヒスチジンタグは、タンパク質精製、ウエスタンブロット、免疫沈降、免疫組織化学など、さまざまな実験に使用されています。以前の研究では、抗HIS-TAG抗体（His-Probe（H3）、カタログ＃を使用して、HEK293TまたはHELA細胞からのタンパク質溶解物のウエスタンブロットで、約60 kDの「非特異的」内因性タンパク質を繰り返し検出しました。、SC-8036、Santa Cruz Biotech。ここでは、抗HIS-TAG抗体を使用してHeLa核抽出物からタンパク質を免疫沈降させ、60 kDバンドを切除し、LC-MS/MSにさらしました（図1）。タンパク質の2つのペプチドの推定された配列は、ヒト転写調節因子YY1（Yin and Yang 1、Uniprot ID、P25490、図2）と一致し、NH2に11のヒスチジン残基（アミノ酸70から80）に11のヒスチジン残基が含まれています。- 既知の機能のない末端領域（Lee et al。、Nucleic AcidsRes。23（1995）925-931; Bushmeyer et al。、J。Biol。Chem。270（1995）30213-30220）。他のヒスチジン反射タンパク質をコードする遺伝子もゲノムに存在するため（Salichs et al。、PlosGenet。5（2009）E1000397）、YY1が抗体によって発現および認識できる唯一の内因性タンパク質ではない可能性があります。将来の実験におけるさまざまなサンプルのソースで。さまざまな内因性ヒスチジン反射タンパク質の存在は、His-TAG抗体を使用した実験からのデータを注意して解釈する必要があることを示唆しています。これは、ウエスタンブロットの「非特異的」バンドの解釈の例を提供することにより、より広範な科学コミュニティにとっても役立つかもしれません。

Histidine-tags have been used for a wide variety of experiments including protein purification, Western blots, immunoprecipitation and immunohistochemistry. In our previous studies, we have repeatedly detected a 'non-specific' endogenous protein of about 60 kD in Western blots of protein lysates from HEK293T or HeLa cells using the anti-His-tag antibody (His-probe (H3), catalogue #, SC-8036, Santa Cruz Biotech. Co.) (Yu et al., J. Biol. Chem. 284 (2009) 1505-1513). Here we have immunoprecipitated the protein from HeLa nuclear extracts using the anti-His-tag antibody, excised the 60 kD band and subjected it to LC-MS/MS (Fig. 1). The deduced sequences of two peptides of the protein match the human transcriptional regulator YY1 (Yin and Yang 1, UniProt ID, P25490, Fig. 2), which contains 11 histidine residues in a stretch (from amino acid 70 to 80) at its NH2-terminal region without known functions (Lee et al., Nucleic Acids Res. 23 (1995) 925-931; Bushmeyer et al., J. Biol. Chem. 270 (1995) 30213-30220). Since genes encoding other Histidine-repeat proteins also exist in the genome (Salichs et al., PLoS Genet. 5 (2009) e1000397), it is possible that YY1 might not be the only endogenous protein that could be expressed and recognized by the antibody in different sources of samples in future experiments. The presence of various endogenous histidine-repeat proteins suggests that data from experiments particularly immunostaining using His-tag antibodies need to be interpreted with caution. This might also be useful to the broader scientific community by providing an example for the interpretation of 'non-specific' bands in Western blots.