2-ThioおよびC5-トリアゾリルフェニル - デオキシミジン修飾化アンチセンスオリゴヌクレオチドを伴う変異体ハンチチンの対立遺伝子選択阻害

RNase H Gapmer Antisense Oligonucleotides（ASOS）のギャップ領域内の4つの位置で、2-チオデオキシチミジン（2S-DT）またはC5-トリアゾールフェニル - デオキシ酸チミジン（5-TRPH-DT）の単一の取り込みを導入する効果を報告します。ヒト患者の線維芽細胞における野生型および変異体ハンチチンmRNAの減少。これらの修飾により、組換えヒトRNase H1によるASO/RNAヘテロドゥプレックスの処理が位置依存的に調節できることを示します。また、ASO/RNAヘテロドゥプレックスに結合したヒトRNase Hの触媒ドメインの構造モデルを作成して、細胞および生化学的アッセイの活性と選択性の観測を合理化しました。私たちの結果は、ASOの行動に大きな変化をもたらすギャップ領域の化学的修飾の能力を強調しています。

We report the effect of introducing a single incorporation of 2-thio-deoxythymidine (2S-dT) or C5-Triazolylphenyl-deoxythymidine (5-TrPh-dT) at four positions within the gap region of RNase H gapmer antisense oligonucleotides (ASOs) for reducing wild-type and mutant huntingtin mRNA in human patient fibroblasts. We show that these modifications can modulate processing of the ASO/RNA heteroduplexes by recombinant human RNase H1 in a position-dependent manner. We also created a structural model of the catalytic domain of human RNase H bound to ASO/RNA heteroduplexes to rationalize the activity and selectivity observations in cells and in the biochemical assays. Our results highlight the ability of chemical modifications in the gap region to produce profound changes in ASO behavior.