喘息のマウスモデルにおける気道へのSiglec-F（高）CD11C（低）好酸球の表現型の可塑性とターゲティング

喘息における好酸球の動員は、肺間質への内皮経由の移動と気道への上皮経由の移動の両方を含む多段階プロセスです。内皮経由のステップは十分に研究されていますが、上皮経由の募集はあまり理解されていません。これら2つのコンパートメント間の好酸球の動員を対比するために、喘息のマウス動態モデルを採用しました。好酸球は、各卵形（OVA）チャレンジの6時間後に、消化された肺組織と気管支肺胞洗浄（BAL）の多色のフローサイトメトリーによって同時に表現型化されました。OVAチャレンジ後の組織好酸球の早期拡大と、その後、喘息モデルの過程でのコンパートメントと表現型のシフトの両方に好酸球の蓄積が続きました。肺組織のSiglec-F（MED）CD11C（ - ）からSIGLEC-F（高）CD11C（低）表現型への段階的移行は、すべてのバルエオシノフィルが後者の表現型であったため、気道への好酸球の動員と関連していました。組織活性化好酸球の二次マイクロアレイ分析では、粘膜との相互作用を示唆する特定のインテグリンおよびケモカイン受容体のシグネチャのアップレギュレーションが示されました。接着アッセイを使用して、cd11cをインテグリンを媒介する好酸球のフィブリノーゲンへの接着が、上皮バリアの修復とリモデリングの重要な成分であることを実証しました。私たちの知る限り、これは、アレルギー性炎症中に展開する際に、好酸球増加の区画化を分析する唯一のレポートです。フローサイトメトリーとソーティングを使用して、組織とBALの両方の好酸球表現型変化の速度論を捕捉することにより、特定の好酸球菌の表現型シフトとそれらのエピテリアル運動の表現型シフトとの間の以前に文書化されていない関連性を実証することができました。これらの細胞を粘膜気道を標的とするメカニズム。

Eosinophil recruitment in asthma is a multistep process, involving both trans-endothelial migration to the lung interstitium and trans-epithelial migration into the airways. While the trans-endothelial step is well studied, trans-epithelial recruitment is less understood. To contrast eosinophil recruitment between these two compartments, we employed a murine kinetics model of asthma. Eosinophils were phenotyped by multicolor flow cytometry in digested lung tissue and bronchoalveolar lavage (BAL) simultaneously, 6 h after each ovalbumin (OVA) challenge. There was an early expansion of tissue eosinophils after OVA challenge followed by eosinophil buildup in both compartments and a shift in phenotype over the course of the asthma model. Gradual transition from a Siglec-F(med) CD11c(-) to a Siglec-F(high) CD11c(low) phenotype in lung tissue was associated with eosinophil recruitment to the airways, as all BAL eosinophils were of the latter phenotype. Secondary microarray analysis of tissue-activated eosinophils demonstrated upregulation of specific integrin and chemokine receptor signature suggesting interaction with the mucosa. Using adhesion assays, we demonstrated that integrin CD11c mediated adhesion of eosinophils to fibrinogen, a significant component of epithelial barrier repair and remodeling. To the best of our knowledge, this is the only report to date dissecting compartmentalization of eosinophil recruitment as it unfolds during allergic inflammation. By capturing the kinetics of eosinophil phenotypic change in both tissue and BAL using flow cytometry and sorting, we were able to demonstrate a previously undocumented association between phenotypic shift of tissue-recruited eosinophils and their trans-epithelial movement, which implicates the existence of a specific mechanism targeting these cells to mucosal airways.