エキソソームを介した細胞への小さな干渉RNAの送達

エキソソームは、多くの異なる細胞タイプによって細胞外環境に分泌されるエンドサイトーシス起源の直径30〜100 nmの小さな膜結合小胞です。エキソソームは、タンパク質、脂質、およびRNAをレシピエント細胞に転写することにより、細胞間コミュニケーションに役割を果たします。ヒト細胞からのエクソソームは、治療用RNAを細胞に提供するためにベクターとして使用できます。ここでは、エレクトロポレーションを使用して、外因性の小さな干渉RNAをさまざまな種類のヒトエキソソームに首尾よく導入し、その後レシピエント細胞に送達する方法について説明します。フローサイトメトリー、共焦点顕微鏡、ノーザンブロットなど、エキソソームと細胞内のsiRNAの存在を確認するために使用される方法が提示されます。

Exosomes are small membrane bound vesicles between 30 and 100 nm in diameter of endocytic origin that are secreted into the extracellular environment by many different cell types. Exosomes play a role in intercellular communication by transferring proteins, lipids, and RNAs to recipient cells.Exosomes from human cells could be used as vectors to provide cells with therapeutic RNAs. Here we describe how exogenous small interfering RNAs may successfully be introduced into various kinds of human exosomes using electroporation and subsequently delivered to recipient cells. Methods used to confirm the presence of siRNA inside exosomes and cells are presented, such as flow cytometry, confocal microscopy, and Northern blot.