心筋細胞のカルシウムダイナミクスの研究に適用される高速SCMOSベースの斜め平面顕微鏡

斜め平面顕微鏡（OPM）は、蛍光励起と収集の両方に単一の高数値開口顕微鏡目的を使用するライトシート顕微鏡の一種です。この論文では、OPMの相対的な収集効率の測定を提示します。次に、2つのSCMOSカメラを組み込んだOPMシステムが導入され、単一の分離された心筋細胞を、960×200ピクセルで667フレームで2次元で22秒で22秒間、960×200×20ボクセルで960×200×20ボクセルで30秒間連続して研究します。毎秒。どちらの場合も、OPMは2つのスペクトルチャネルで記録することができ、プローブFLUO-4 AMを介して筋細胞腫と横尿細管ネットワークを介して同時に膜染料細胞マスクオレンジを介して研究できるようにします。次に、OPMシステムを適用して、自然カルシウム波の空間起源を初めて決定し、その産点で細胞横尿細管構造を測定しました。OPMシステムを使用して、横尿細管構造との関係に応じてカルシウムスパークパラメーターを研究するためにも使用できることを実証するために、さらなる結果が提示されています。

Oblique plane microscopy (OPM) is a form of light sheet microscopy that uses a single high numerical aperture microscope objective for both fluorescence excitation and collection. In this paper, measurements of the relative collection efficiency of OPM are presented. An OPM system incorporating two sCMOS cameras is then introduced that enables single isolated cardiac myocytes to be studied continuously for 22 seconds in two dimensions at 667 frames per second with 960 × 200 pixels and for 30 seconds with 960 × 200 × 20 voxels at 25 volumes per second. In both cases OPM is able to record in two spectral channels, enabling intracellular calcium to be studied via the probe Fluo-4 AM simultaneously with the sarcolemma and transverse tubule network via the membrane dye Cellmask Orange. The OPM system was then applied to determine the spatial origin of spontaneous calcium waves for the first time and to measure the cell transverse tubule structure at their point of origin. Further results are presented to demonstrate that the OPM system can also be used to study calcium spark parameters depending on their relationship to the transverse tubule structure.