大腸菌のさまざまなRECAタンパク質活動を解離する新しいRECA変異は、UV変異誘発におけるRECAタンパク質の追加の役割の証拠を提供します

Recaタンパク質機能に異なる影響を与える新しいReca変異を伴う株を分離するために、in vitroでプラスミドミニFによって運ばれたReca遺伝子を変異誘入し、その後、ミニ-F-Recaプラスミドを、Prophage Phi 80とリソジェン性のあるDelta Reca宿主に導入しました。ラックの複製を運んだ。Prophageの誘導とLACの複製の組換えを記録することにより、新しいReca変異を分離しました。変異を運ぶ株RECA1734（ARG-243がLEUに変更）は、PHI 80誘導では不足しているが、組換えに熟練していることがわかった。変異は、lexa（def）の背景であっても、uvで変化しないホストをレンダリングしました。しかし、RECA1734宿主は、UMUDの活性カルボキシル末端断片であるUMUD*をコードするプラスミドの導入と交換可能になりました。RECA1734変異により、ラムダおよびレクサリプレッサーの切断が可能になりますが、PHI 80リプレッサーとUMUDタンパク質の切断に宿主を不足させます。別の株を運ぶ突然変異RECA1730（Ser-117がPHEに変更）は、PHI 80誘導に熟練しているが、再結合が不足していることがわかった。突然変異によって与えられた組換え欠陥は、レクサ抑制因子を欠いている細胞で部分的に緩和され、増幅された場合、Reca1730タンパク質が再結合で活性であることを示唆しています。レクサタンパク質はRecA1730株で不十分に切断されているが、ファージラムダは誘導されたため、RecA1730タンパク質はレクサタンパク質切断を特異的に媒介できないと結論付けています。我々の結果は、Reca1734およびReca1730変異がさまざまな基質の切断に異なる影響に影響することを示しています。RECA1730変異は、UMUD*をコードするプラスミドのホストへの導入時でさえ、UV変異誘発を防止し、Reca+よりも支配的でした。他のRECA関数に関しては、Reca1730はReca+に劣るものでした。これは、RECAタンパク質が、レクサタンパク質とUMUDタンパク質の切断を媒介することに加えて、突然変異誘発に追加の役割を持っていることを示しています。

To isolate strains with new recA mutations that differentially affect RecA protein functions, we mutagenized in vitro the recA gene carried by plasmid mini-F and then introduced the mini-F-recA plasmid into a delta recA host that was lysogenic for prophage phi 80 and carried a lac duplication. By scoring prophage induction and recombination of the lac duplication, we isolated new recA mutations. A strain carrying mutation recA1734 (Arg-243 changed to Leu) was found to be deficient in phi 80 induction but proficient in recombination. The mutation rendered the host not mutable by UV, even in a lexA(Def) background. Yet, the recA1734 host became mutable upon introduction of a plasmid encoding UmuD*, the active carboxyl-terminal fragment of UmuD. Although the recA1734 mutation permits cleavage of lambda and LexA repressors, it renders the host deficient in the cleavage of phi 80 repressor and UmuD protein. Another strain carrying mutation recA1730 (Ser-117 changed to Phe) was found to be proficient in phi 80 induction but deficient in recombination. The recombination defect conferred by the mutation was partly alleviated in a cell devoid of LexA repressor, suggesting that, when amplified, RecA1730 protein is active in recombination. Since LexA protein was poorly cleaved in the recA1730 strain while phage lambda was induced, we conclude that RecA1730 protein cannot specifically mediate LexA protein cleavage. Our results show that the recA1734 and recA1730 mutations differentially affect cleavage of various substrates. The recA1730 mutation prevented UV mutagenesis, even upon introduction into the host of a plasmid encoding UmuD* and was dominant over recA+. With respect to other RecA functions, recA1730 was recessive to recA+. This demonstrates that RecA protein has an additional role in mutagenesis beside mediating the cleavage of LexA and UmuD proteins.