シアリダーゼ特異性をプロファイリングすることにより、ジアジリン修飾シアリル化糖タンパク質の強化された架橋

sialic-acidを介した相互作用は、細胞表面に重要な役割を果たし、この重要な単糖を研究する方法の開発の推進力を提供します。特に、細胞表面に組み込まれた光クロスリンクシアル酸は、架橋を介してシアル酸とシアル酸認識タンパク質との間の一時的な相互作用の共有結合を捕捉できるようになりました。ただし、細胞表面に存在する天然シアル酸も、結合イベントで光クロスリンクシアル酸と競合し、架橋収量を制限します。そのような光クロスリンクシアル酸シアダズの有用性を改善するために、グリココンジュゲートからシアル酸を除去する多くのシアリダーゼ、酵素を調べて、天然シアル酸を切断しますが、シアダズに向かって不活性なままであるものを見つけました。このシアリダーゼを使用して、抗ジアリルルイスX抗体とエンドグリンのSiadazを介した架橋を改善しました。このプロトコルは、一般にSialic-ACIDを介した相互作用に適用でき、シアル酸結合パートナーの識別を促進します。

Sialic-acid-mediated interactions play critical roles on the cell surface, providing an impetus for the development of methods to study this important monosaccharide. In particular, photo-cross-linking sialic acids incorporated onto cell surfaces have allowed covalent capture of transient interactions between sialic acids and sialic-acid-recognizing proteins via cross-linking. However, natural sialic acids also present on the cell surface compete with photo-cross-linking sialic acids in binding events, limiting cross-linking yields. In order to improve the utility of one such photo-cross-linking sialic acid, SiaDAz, we examined a number of sialidases, enzymes that remove sialic acids from glycoconjugates, to find one that would cleave natural sialic acids but remain inactive toward SiaDAz. Using this sialidase, we improved SiaDAz-mediated cross-linking of an antisialyl Lewis X antibody and of endoglin. This protocol can be applied generally to sialic-acid-mediated interactions and will facilitate identification of sialic acid binding partners.