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Rapid communications in mass spectrometry : RCM2015Dec30Vol.29issue(24)

イオンペアリバース液相クロマトグラフィー/エレクトロスプレーイオン化質量分析分析のイオンペア試薬とカウンターアニオンの比較合成オリゴヌクレオチドの質量分析分析

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文献タイプ:
  • Journal Article
概要
Abstract

理論的根拠:イオンペア逆位相液体クロマトグラフィー/エレクトロスプレーイオン化質量分析(IP-RP-LC/ESI-MS)は、オリゴヌクレオチドの品質制御に広く使用されています。しかし、研究者はまだオリゴヌクレオチドのIP-RP-LC/ESI-MS分析のための移動相システムを改善することを検討しています。この研究では、オリゴヌクレオチドのIP-RP-LC/ESI-MS分析のための3つの異なるカウンターアニオンを持つ6つのイオンペアリング試薬の性能を比較しました。 方法:この研究は、UPLC®OSTカラム(2.1 mm×100 mm、1.7 µm)を使用して、Waters LCT Premier XE Mass Mass Spectrometerに結合したWaters Ultra-Performance Liquid Chromatography(UPLC®)システムを使用して実施されました。酢酸塩、重炭酸塩、およびヘキサフルオロイソプロパノール塩塩を含む緩衝系(トリエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、ヘキシルアミン、N、n-ジメチルブチルアミン、ジブチルアミン、N、N、n-ジソプロピルアミン)、n-diisopropylamine)。オリゴヌクレオチドの分離には、最適化された条件が適用されました。 結果:カウンターアニオンは、オリゴヌクレオチドのIP-RP-LC/ESI-MS分析において間違いなく役割を果たします。30 mMジイソプロピルエチルアミンと200 mMヘキサフルオロイソプロパノールを含む緩衝液は、変形していない異種オリゴヌクレオチドの最高の分離をもたらしましたが、トリプロピルアンモニウムヘキサフルオロイソプロパノレートは、シーケンスイソマーの最も強化された分離を達成しました。しかし、酢酸トリエチルアンモニウムと重炭酸塩は、位置異性体に対して最も高い分離をもたらしました。 結論:オリゴヌクレオチドのIP-RP-LC/ESI-MS分離は主に配列に依存しますが、移動相に存在するイオンペアリング試薬とカウンターアニオンのタイプの両方にも依存しています。

理論的根拠:イオンペア逆位相液体クロマトグラフィー/エレクトロスプレーイオン化質量分析(IP-RP-LC/ESI-MS)は、オリゴヌクレオチドの品質制御に広く使用されています。しかし、研究者はまだオリゴヌクレオチドのIP-RP-LC/ESI-MS分析のための移動相システムを改善することを検討しています。この研究では、オリゴヌクレオチドのIP-RP-LC/ESI-MS分析のための3つの異なるカウンターアニオンを持つ6つのイオンペアリング試薬の性能を比較しました。 方法:この研究は、UPLC®OSTカラム(2.1 mm×100 mm、1.7 µm)を使用して、Waters LCT Premier XE Mass Mass Spectrometerに結合したWaters Ultra-Performance Liquid Chromatography(UPLC®)システムを使用して実施されました。酢酸塩、重炭酸塩、およびヘキサフルオロイソプロパノール塩塩を含む緩衝系(トリエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、ヘキシルアミン、N、n-ジメチルブチルアミン、ジブチルアミン、N、N、n-ジソプロピルアミン)、n-diisopropylamine)。オリゴヌクレオチドの分離には、最適化された条件が適用されました。 結果:カウンターアニオンは、オリゴヌクレオチドのIP-RP-LC/ESI-MS分析において間違いなく役割を果たします。30 mMジイソプロピルエチルアミンと200 mMヘキサフルオロイソプロパノールを含む緩衝液は、変形していない異種オリゴヌクレオチドの最高の分離をもたらしましたが、トリプロピルアンモニウムヘキサフルオロイソプロパノレートは、シーケンスイソマーの最も強化された分離を達成しました。しかし、酢酸トリエチルアンモニウムと重炭酸塩は、位置異性体に対して最も高い分離をもたらしました。 結論:オリゴヌクレオチドのIP-RP-LC/ESI-MS分離は主に配列に依存しますが、移動相に存在するイオンペアリング試薬とカウンターアニオンのタイプの両方にも依存しています。

RATIONALE: Ion-pair reversed-phase liquid chromatography/electrospray ionization mass spectrometry (IP-RP-LC/ESI-MS) has been widely used for the quality control of oligonucleotides. However, researchers are still looking to improve mobile phase systems for IP-RP-LC/ESI-MS analysis of oligonucleotides. This study compared the performance of six ion-pairing reagents with three different counter anions for IP-RP-LC/ESI-MS analysis of oligonucleotides. METHODS: The study was performed using a Waters ultra-performance liquid chromatography (UPLC®) system coupled to a Waters LCT Premier XE mass spectrometer by using a UPLC® OST column (2.1 mm × 100 mm, 1.7 µm). Buffer systems containing acetate, bicarbonate, and hexafluoroisopropanolate salts of six ion-pairing reagents (triethylamine, tripropylamine, hexylamine, N,N-dimethylbutylamine, dibutylamine, N,N-diisopropylethylamine), respectively, were optimized for IP-RP-LC/ESI-MS analysis of oligonucleotides, and then the optimized conditions were applied for the separation of oligonucleotides. RESULTS: Counter anions definitely play a role in IP-RP-LC/ESI-MS analysis of oligonucleotides. Buffer containing 30 mM diisopropylethylamine and 200 mM hexafluoroisopropanol provided the highest separation of unmodified heterogeneous oligonucleotides, but tripropylammonium hexafluoroisopropanolate achieved the most enhanced separation of sequence isomers. However, triethylammonium acetate and bicarbonate had equally the highest separation for positional isomers. CONCLUSIONS: IP-RP-LC/ESI-MS separation of oligonucleotides is mainly sequence dependent, but it is also dependent on both the type of ion-pairing reagent and counter anion present in the mobile phase.

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