[FM4-64およびHoechst染料による細菌膜と核の標識と局在の最適化]

目的：細胞内局在のために細菌の細胞膜と核を観察する。 方法：FM4-64とHoechstは、それぞれ細胞膜と核を標識できる染色されました。両方の色素を使用して、8つの細菌株の膜と核（大腸菌、黄色ブドウ球菌、緑膿菌、肺炎球菌、Yersinia Pestis、Legionella肺炎、Cholaio、bacillus anthracis）を共染色するために使用されました。大腸菌を異なる染料濃度と時間で染色し、その後、共焦点蛍光顕微鏡イメージングによって観察されました。 結果：細胞膜と核の蛍光強度は、色素濃度と時間の影響を受けます。最適な条件は、次のように決定されました。20μg/mL FM4-64で1分間細胞膜を染色し、20μg/mL Hoechstを20分間の細胞核で20分間染色します。グラム陰性菌は、FM4-64dyeを含むグラム陽性細菌よりも染色されました。 結論：FM4-64およびHoechstは、さまざまな種類の細菌で膜と核を染色するために使用できます。細菌膜と核を共染色すると、細胞内局在を研究するための原核生物の細胞構造を観察するための参照が提供されます。

OBJECTIVE: To observe cell membrane and nucleus in bacteria for subcellular localization. METHODS: FM4-64 and Hoechst were dyed that can label cell membrane and nucleus, respectively. Both dyes were used to co-stain the membranes and nucleus of eight bacterial strains ( Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Yersinia pestis, Legionella pneumonia, Vibrio cholerae and Bacillus anthracis). E. coli was dyed with different dye concentrations and times and then observed by confocal fluorescence microscopic imaging. RESULTS: Fluorescence intensity of cell membrane and nucleus is affected by dye concentrations and times. The optimal conditions were determined as follows: staining cell membrane with 20 μg/mL FM4-64 for 1 min and cell nucleus with 20 μg/mL Hoechst for 20 min. Gram-negative bacteria were dyed better than gram-positive bacteria with FM4-64dye. CONCLUSION: FM4-64 and Hoechst can be used to stain membrane and nucleus in different types of bacteria. Co-staining bacterial membrane and nucleus provides the reference to observe cell structure in prokaryotes for studying subcellular localization.