毛根誘導プラスミドPRIA4の調節タンパク質バルグの推定スタートコドンTTG4

アグロピン型の毛型根を誘導するプラスミドPRIA4の転写活性化因子のためのVirg遺伝子のヌクレオチド配列が決定されました。シーケンスには、1つの可能なオープンリーディングフレームが含まれていました。26.5 kDaの分子サイズの遺伝子産物は、テンプレートとしてクローン化されたVirgプラスミドを使用して、大腸菌結合転写翻訳システムによって同定されました。ただし、そのようなタンパク質を生じさせることができるATGもGTGスタートコドンもヌクレオチド配列で同定されませんでした。代わりに、TTGはStart Codonの候補として発見されました。このTTGは、他のほとんどのTTG開始コドンと同様に、16S rRNAの3'END領域とイニシエーターTRNAのT psiループをそれぞれ相補的なShine-Dalgarno（SD）シーケンスとT信号の両方によって先行しました。TTGでの開始のさらなる証拠は、遺伝子融合実験によって得られました。発現が上流の領域からの転写と翻訳に完全に依存する大腸菌LACZ遺伝子が、TTG配列の直接上流または下流のVirgと接続された場合、後者の融合遺伝子のみが、植物のフェノール化合物、アセトシルンン、アグロバクテリウム細胞のベータガラクトシダーゼ活性を発現しました。SDシーケンスとTシグナルが前に先行するTTGコドンは、以前に報告された他の3つの腫瘍誘導プラスミドのVirg配列にも保存されています。

The nucleotide sequence of the virG gene for a transcriptional activator on the agropine-type hairy-root-inducing plasmid pRiA4 was determined. The sequence contained one possible open reading frame. The gene product with a molecular size of 26.5 kDa was identified by an Escherichia coli coupled-transcription-translation system using cloned virG plasmids as templates. However, neither an ATG nor a GTG start codon which could give rise to such a protein was identified in the nucleotide sequence. Instead, TTG was found as a candidate for the start codon. This TTG was preceded, like most other TTG start codons, by both a Shine-Dalgarno (SD) sequence and a T signal which are respectively complementary to the 3'-end region of 16S rRNA and the T psi loop of initiator tRNA. Further evidence for the start at TTG was obtained by gene fusion experiments. When the E. coli lacZ gene, whose expression entirely depends on the transcription and translation from upstream regions, was connected in-phase with virG either directly upstream or downstream of the TTG sequence, only the latter fused gene expressed the beta-galactosidase activity in Agrobacterium cells in response to a plant phenolic compound, acetosyringone. The TTG codon preceded by an SD sequence and a T signal is also conserved in the virG sequences from other three tumor-inducing plasmids previously reported.