[RIP140-SIRNAをKupffer細胞にトランスフェクトする際の異なるトランスフェクション試薬の効率と細胞毒性の比較]

目的：RIP140-siRNAのKupffer細胞へのトランスフェクションに使用されるさまざまなトランスフェクション試薬の効率と細胞毒性を比較して、トランスフェクション条件を最適化します。 方法：Kupffer細胞に、Lipofectamine 2000、Roche遺伝子試薬（X-TREME遺伝子siRNAトランスフェクション試薬）およびPuROスクリーニングレンチウイルス（1.0×10（8）TU/ML）を使用してレポーター遺伝子としてGFPで標識されたRIP140-SIRNAをトランスフェクト化としてトランスフェクト化としてトランスフェクトしました。試薬。トランスフェクション効果は、蛍光逆顕微鏡下で観察され、レーザー走査型共焦点顕微鏡検査を使用して、TrasNfected Kupffer細胞でのRIP140発現を分析しました。細胞アポトーシスを検出するためにフローサイトメトリーを実施し、CCK-8テストを使用して細胞増殖阻害を評価しました。RT-RCRおよびウエスタンブロットティングを実施して、トラスに感染した細胞でRIP140 mRNAとタンパク質の発現を検出しました。 結果：PUROスクリーニングレンチウイルスは、90％を超えた最高の細胞トランスフェクション効率をもたらし、その後ロシュ試薬、その後リポフェクタミン2000が続きました。フローサイトメトリーとCCK-8テストは、細胞毒性がRoche試薬で最も軽度であり、レンティウイルスで中程度であることを示しました。リポフェクタミン2000で重度。レンチウイルスをトラスした細胞は、リポフェクタミン2000およびRoche Reagentでトラスを受けた細胞よりも有意に低いRI​​P140発現を示しました（P <0.05）。 結論：Kupffer細胞では、他の2つのTrasnfection試薬と比較して、レンチウイルスを介したトランスフェクションは、相対的な低細胞毒性と良好なトランスフェクション効率を達成し、トラスンフェクト条件のより良い制御性と安定性を可能にします。

OBJECTIVE: To compare the efficiency and cytotoxicity of different transfection reagents used in transfection of RIP140-siRNA into Kupffer cells to optimize the transfection conditions. METHODS: Kupffer cells were transfected with RIP140-siRNA labeled with GFP as the reporter gene using lipofectamine 2000, Roche reagent (X-treme GENE siRNA Transfection Reagent) and puro screening lentivirus (1.0×10(8) TU/mL) as the transfection reagents. The transfection effect was observed under a fluorescent inverted microscope, and laser scanning confocal microscopy was used to analyze RIP140 expression in trasnfected Kupffer cells. Flow cytometry was performed to detect cell apoptosis, and CCK-8 test was used to evaluate the cell proliferation inhibition. RT-RCR and Western blotting were performed to detect the expressions of RIP140 mRNA and protein in the trasnfected cells. RESULTS: Puro screening lentivirus yielded the highest cell transfection efficiency, which exceeded 90%, followed by Roche reagent and then by lipofectamine 2000. Flow cytometry and CCK-8 test showed that the cytotoxicity was the mildest with Roche reagent, moderate with lentivirus, and severe with lipofectamine 2000. The cells trasnfected with lentivirus showed a significantly lower RIP140 expression than cells trasnfected with lipofectamine 2000 and Roche reagent (P<0.05). CONCLUSION: In Kupffer cells, lentivirus-mediated transfection, as compared with the other two trasnfection reagents, can achieve good transfection efficiency with a relativelty low cytotoxicity, and allows for better controllability and stability of the trasnfectiion conditions.