複製の開始部位へのMCM10の募集には、ミニクロモソーム維持（MCM）複合体への直接結合が必要です

MCM10は真核生物DNA複製の開始に必要であり、CDC45-MCM-Gins（CMG）ヘリカーゼの活性化に何らかの未知の方法で寄与します。MCM10が複製の開始部位にどのように局在するかは不明です。現在のモデルは、ミニクロモソーム維持（MCM）への直接結合が役割を果たしていることを示しているため、この相互作用の詳細と機能的重要性は決定されていません。ここでは、精製されたMCM10がDNAに結合した二重六角形とMCMの可溶性シングルヘキサマーの両方に結合できることを示します。MCM10のMCMへの結合には、MCM10 C末端が必要です。さらに、MCMのMCM10の結合部位には、MCM2およびMCM6サブユニットが含まれており、負荷係数CDT1のサブユニットが重複しています。MCM10の複製起源への募集がCMGヘリカーゼアセンブリに依存するかどうかは不明です。MCM10の募集は、CMGアセンブリ（「G1-like」）の非存在下での低アフィニティリクルートメントと、CMGアセンブリが行われるときの高い親和性リクルートメント（「S-Sphase-like」）で2つのモードを介して発生することを示します。MCMに直接結合できないMCM10は、両方の募集モードで欠陥があり、DNA複製をサポートできません。これらの発見は、MCM10がMCM10 C末端を介してMCMを直接結合することにより、MCM10が複製開始部位に局在することを示しています。

Mcm10 is required for the initiation of eukaryotic DNA replication and contributes in some unknown way to the activation of the Cdc45-MCM-GINS (CMG) helicase. How Mcm10 is localized to sites of replication initiation is unclear, as current models indicate that direct binding to minichromosome maintenance (MCM) plays a role, but the details and functional importance of this interaction have not been determined. Here, we show that purified Mcm10 can bind both DNA-bound double hexamers and soluble single hexamers of MCM. The binding of Mcm10 to MCM requires the Mcm10 C terminus. Moreover, the binding site for Mcm10 on MCM includes the Mcm2 and Mcm6 subunits and overlaps that for the loading factor Cdt1. Whether Mcm10 recruitment to replication origins depends on CMG helicase assembly has been unclear. We show that Mcm10 recruitment occurs via two modes: low affinity recruitment in the absence of CMG assembly ("G1-like") and high affinity recruitment when CMG assembly takes place ("S-phase-like"). Mcm10 that cannot bind directly to MCM is defective in both modes of recruitment and is unable to support DNA replication. These findings indicate that Mcm10 is localized to replication initiation sites by directly binding MCM through the Mcm10 C terminus.