フィブリン（OGEN）とヒアルロン酸の間の特定の相互作用：止血、炎症、創傷治癒における可能な結果

私たちは、フィブリンとヒアルロン酸（HA）が炎症や創傷治癒中の高分子調節因子であることを提案しました。ここでは、研究を拡張して、フィブリン（OGEN）とHAの間の特定の相互作用を特徴付けます。125i標識HA（MR約32,000）は、ヒトフィブリノーゲンでコーティングされたプラスチック表面に結合していましたが、ウシ血清アルブミン、卵形、またはウサギ免疫グロブリンG。サイズに依存する方法でHAオリゴ糖によって具体的に溶出されました。タンパク質がニトロセルロースに吸着され、125i-HAでプローブされたドットブロットアッセイも、ヒトフィブリノーゲンに特異的結合を示しました。このアッセイは、他の哺乳類種のフィブリノゲンを調べるために使用されました。馬、ラット、または牛のタンパク質では、特定の125i-HA結合は観察されませんでした。人間、羊、ウサギ、犬、ヒヒ、ヤギ、豚のフィブリノゲンで有意な結合が検出されました。フィブリン塊のトロンビン誘発性形成もHAの影響を受けます。これは、凝固前の遅延時間を減少させ、凝固の形成速度を増加させます。フィブリン重合の速度は、60ミクロムHAの存在下で500％を超えて増加しました。さらに、光散乱によって評価されるフィブリンゲルの構造は、濃度依存的にHAまたはコンドロイチン硫酸によって変更されました。結果は、提案された創傷治癒モデルをサポートし、循環HAレベルの増加が血液症に悪影響を及ぼし、血栓症または出血のリスクを高める可能性があることを示しています。HAとフィブリノーゲン間の相互作用は、血液からのグリコサミノグリカンの除去における肝臓内皮細胞HA受容体の重要性を強調しています。培養細胞は、シクロヘキシミドの存在下でさえ、少なくとも50分ごとに総細胞HA受容体を4時間継続的にエンドサイトーシングしました。したがって、このエンドサイトーシス受容体は、リサイクルシステムの一部であることが示されました。

We have proposed that fibrin and hyaluronan (HA) are macromolecular regulators during inflammation and wound healing. Here we extend our studies to characterize the specific interaction between fibrin(ogen) and HA. 125I-labelled HA (Mr approximately 32,000) was bound by plastic surfaces coated with human fibrinogen but not bovine serum albumin, ovalbumin, beta-lactoglobin or rabbit immunoglobulin G. 125I-labelled fibrinogen bound to a unique hexylamine derivative of HA coupled to Sepharose and was eluted specifically by HA oligosaccharides in a size-dependent manner. A dot blot assay, in which proteins are adsorbed to nitrocellulose and probed with 125I-HA, also showed specific binding to human fibrinogen. This assay was used to examine fibrinogens from other mammalian species. No specific 125I-HA binding was observed with the protein from horse, rat or cow. Significant binding was detected with human, sheep, rabbit, dog, baboon, goat and pig fibrinogens. Thrombin-induced formation of fibrin clots is also affected by HA, which decreases the lag time before clotting and increases the rate of clot formation. The rate of fibrin polymerization increased over 500% in the presence of 60 microM HA. Furthermore, the structure of the fibrin gel, as assessed by light scattering, was altered by HA or chondroitin sulphate in a concentration-dependent manner. The results support the proposed wound-healing model and indicate that an increase in circulating HA levels could adversely affect haemostasis and increase the risk of thrombosis or bleeding. The interaction between HA and fibrinogen emphasizes the importance of the liver endothelial cell HA receptor in the removal of glycosaminoglycans from the blood. Cultured cells continuously endocytosing 125I-HA for 4 h reutilized their total cellular HA receptors at least once every 50 min even in the presence of cycloheximide. This endocytotic receptor was therefore shown to be part of a recycling system.