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低コストの市販の酵素試薬（これらのプロテアーゼを含む）を使用した、共調したトリプシンとキモトリプシンを使用した毛細血管マイクロ流体反応器の調製と、プロテオミクス研究におけるその有用性の評価が提示されました。グリシジルメタクリレート（GMA）およびエチレングリコールジメタクリレート（EDMA）から合成されたモノリシックコポリマーをサポートとして使用しました。第一に、重合条件を最適化し、モノリシック層を3-（トリメトキシシリル）プロピルメタクリレート（γ-Maps）で修飾した融合シリカ毛細血管で合成されました。次に、エポキシ基を含むポリマーを1,6-ジアミノヘキサンで修飾し、その後グルタルアルデヒドの付着と酵素の固定化を行いました。トリプシン活性に関する調製されたモノリシック固定化酵素マイクロリアクター（μ-IMER）の効率は、低分子質量化合物（Nα-ベンゾイル-L-アルギニンエチルエステル、BAEE）を使用して評価されました。両方の酵素の活性は、基質として高分子タンパク質（ヒトトランスフリン、TF）を使用して調査されました。Baeeの場合、反応生成物は毛細血管液クロマトグラフィーを使用して基質から分離され、反応の効率は基質のピーク領域によって決定されました。トランスフェリンの加水分解産物は、プロテオーム研究の分野における調製された酵素システムの適用性の検証を可能にするMALDI-TOFで分析されました。
低コストの市販の酵素試薬（これらのプロテアーゼを含む）を使用した、共調したトリプシンとキモトリプシンを使用した毛細血管マイクロ流体反応器の調製と、プロテオミクス研究におけるその有用性の評価が提示されました。グリシジルメタクリレート（GMA）およびエチレングリコールジメタクリレート（EDMA）から合成されたモノリシックコポリマーをサポートとして使用しました。第一に、重合条件を最適化し、モノリシック層を3-（トリメトキシシリル）プロピルメタクリレート（γ-Maps）で修飾した融合シリカ毛細血管で合成されました。次に、エポキシ基を含むポリマーを1,6-ジアミノヘキサンで修飾し、その後グルタルアルデヒドの付着と酵素の固定化を行いました。トリプシン活性に関する調製されたモノリシック固定化酵素マイクロリアクター（μ-IMER）の効率は、低分子質量化合物（Nα-ベンゾイル-L-アルギニンエチルエステル、BAEE）を使用して評価されました。両方の酵素の活性は、基質として高分子タンパク質（ヒトトランスフリン、TF）を使用して調査されました。Baeeの場合、反応生成物は毛細血管液クロマトグラフィーを使用して基質から分離され、反応の効率は基質のピーク領域によって決定されました。トランスフェリンの加水分解産物は、プロテオーム研究の分野における調製された酵素システムの適用性の検証を可能にするMALDI-TOFで分析されました。
The preparation of capillary microfluidic reactor with co-immobilized trypsin and chymotrypsin with the use of a low-cost commercially available enzymatic reagent (containing these proteases) as well as the evaluation of its usefulness in proteomic research were presented. The monolithic copolymer synthesized from glycidyl methacrylate (GMA) and ethylene glycol dimethacrylate (EDMA) was used as a support. Firstly, the polymerization conditions were optimized and the monolithic bed was synthesized in the fused silica capillary modified with 3-(trimethoxysilyl)propyl methacrylate (γ-MAPS). The polymer containing epoxy groups was then modified with 1,6-diaminohexane, followed by the attachment of glutaraldehyde and immobilization of enzymes. The efficiency of the prepared monolithic Immobilized Enzyme Microreactor (μ-IMER) with regard to trypsin activity was evaluated using the low-molecular mass compound (Nα-benzoyl-l-arginine ethyl ester, BAEE). The activities of both enzymes were investigated using a macromolecular protein (human transferrin, Tf) as a substrate. In the case of BAEE, the reaction product was separated from the substrate using the capillary liquid chromatography and the efficiency of the reaction was determined by the peak area of the substrate. The hydrolysis products of transferrin were analyzed with MALDI-TOF which allows for the verification of the prepared enzymatic system applicability in the field of proteomic research.
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