[EV-A71感染ヒトJurkat T細胞における炎症性サイトカインの産生におけるToll様受容体7の役割7]

目的：エンテロウイルス71（EV-A71）に感染したヒトジュルカットT細胞におけるToll様受容体（TLR）mRNAの発現を調査し、EV-A71感染誘発性炎症の病因におけるTLRの役割を明確にすること。 方法：EV-A71株は、2014年に深Seenzhen Center for Disease Control and Preventionによって手、足、口の疾患のある子供の患者の糞から分離されました。ヒトJurkat T細胞に、10（3）細胞培養感染性用量50％（CCID50）/mLで200μLEV-A71に感染しました。ヒトJurkat T細胞におけるTLR1-TLR10 mRNAの発現は、RT-PCRによって異なる暴露時間に評価されました。TLR7 mRNA発現のレベルは、リアルタイムPCR、およびウエスタンブロットによって骨髄分化因子88（MyD88）のレベルによって検出されました。インターロイキン（IL）-6、IL-8および腫瘍壊死因子α（TNF-α）のサイトカイン分泌をELISAアッセイで分析しました。 結果：ヒトJurkat T細胞におけるTLR7 mRNAの相対発現レベルは、6、12、24、および48時間後に1.26±0.15、1.75±0.20、2.26±0.23および3.74±0.62であり、EV -A71感染の後に3.74±0.62でした。p <0.05）。ウエスタンブロットは、MyD88のタンパク質発現レベルが、模擬感染グループと比較して、EV-A71感染後24時間および48時間で1.34倍、2.17回増加し、2.17回増加したことを示しました。24時間および48時間感染した後、IL -6のレベルは（302.86±38.11）、（179.70±14.50）pg/mlであり、模擬感染グループ（176.42±9.60）よりも有意に高かった（179.70±14.50）PG/ML（T値）。EV-A71感染群（100.81±9.81）pg/mlのTNF-αのレベルは、模擬感染グループ（56.19±6.94）pg/mLのレベルよりも高く、差は有意でした（T = -6.43、P = 0.003）。 結論：TLR7は、免疫細胞のEV-A71認識の原因となる主なパターン認識受容体であり、TLR7下流シグナル伝達の活性化と炎症誘発性サイトカインの産生につながります。

OBJECTIVE: To investigate the expression of Toll-like receptor (TLR) mRNA in enterovirus 71(EV-A71) infected human Jurkat T cells and clarify the role of TLRs in the pathogenesis of EV-A71 infection-induced inflammation. METHODS: EV-A71 strains were isolated from feces of children patients with hand, foot and mouth disease in 2014 by Shenzhen Center for Disease Control and Prevention. Human Jurkat T cells were infected with 200 μl EV-A71 at 10(3) cell culture infective dose 50%(CCID50)/ml. The expression of TLR1-TLR10 mRNA in human Jurkat T cells was assessed at different exposure time by RT-PCR. Levels of TLR7 mRNA expression were detected by real-time PCR, and levels of myeloid differentiation factor 88 (MyD88) by western blot. The cytokine secretion of interleukin (IL)-6, IL-8 and Tumor Necrosis Factor α (TNF-α) was analyzed by ELISA assay. RESULTS: The relative expression level of TLR7 mRNA in human Jurkat T cells were 1.26 ± 0.15, 1.75 ± 0.20, 2.26 ± 0.23 and 3.74 ± 0.62 in 6, 12, 24 and 48 h after EV-A71 infection, which the differences were significant with mock-infected group(t values were -2.96, -6.38, -9.57, -7.71; P<0.05). Western blot showed that the protein expression levels of MyD88 had increased 1.34 times and 2.17 times in 24 h and 48 h after EV-A71 infection compared with mock-infected group. After infected for 24 h and 48 h, the levels of IL-6 were (302.86 ± 38.11), (179.70 ± 14.50) pg/ml, which were significantly higher than mock-infected group (176.42 ± 9.60), (179.70 ± 14.50) pg/ml (t values were -5.57, -18.54, P<0.05). The levels of TNF-α in EV-A71 infected group (100.81 ± 9.81) pg/ml was higher than that in mock-infected group (56.19 ± 6.94) pg/ml, and the difference was significant (t=-6.43, P=0.003). CONCLUSION: TLR7 is the main pattern recognition receptor responsible for EV-A71 recognition in immune cells, which then leads to the activation of TLR7 downstream signaling and the production of proinflammatory cytokines.