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Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)20160101Vol.1421issue()

細胞抽出物中の小さな二重RNAによるアルゴノートタンパク質の負荷

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文献タイプ:
  • Journal Article
概要
Abstract

Argonaute(Ago)タンパク質は、遺伝子調節のRNA干渉(RNAI)メカニズムの実行に必要な最小コアタンパク質です。前のタンパク質は、RNAiを介して遺伝子発現を調節するために、単一の小さなRNAでロードまたは「プログラム」する必要があります。天然の小さなRNAは、通常、AGOタンパク質に効率的かつ特定の負荷に追加の要因を必要とする二本鎖二重鎖です。ここでは、放射性標識の小さな干渉RNA(siRNA)およびHELA細胞抽出物を使用して、ヒトAGO2の負荷を介してRNAiプログラミングを調査するためのプロトコルが説明されています。このプロトコルは、原油または部分精製細胞抽出物から始まるときにRNAiプログラミングを研究するためのAGOロードアッセイを提供します。AGOロードアッセイは、さまざまな哺乳類細胞抽出物を使用して他のAGOタンパク質を研究するのに役立つはずです。

Argonaute(Ago)タンパク質は、遺伝子調節のRNA干渉(RNAI)メカニズムの実行に必要な最小コアタンパク質です。前のタンパク質は、RNAiを介して遺伝子発現を調節するために、単一の小さなRNAでロードまたは「プログラム」する必要があります。天然の小さなRNAは、通常、AGOタンパク質に効率的かつ特定の負荷に追加の要因を必要とする二本鎖二重鎖です。ここでは、放射性標識の小さな干渉RNA(siRNA)およびHELA細胞抽出物を使用して、ヒトAGO2の負荷を介してRNAiプログラミングを調査するためのプロトコルが説明されています。このプロトコルは、原油または部分精製細胞抽出物から始まるときにRNAiプログラミングを研究するためのAGOロードアッセイを提供します。AGOロードアッセイは、さまざまな哺乳類細胞抽出物を使用して他のAGOタンパク質を研究するのに役立つはずです。

Argonaute (Ago) proteins are the minimum core proteins required for executing RNA interference (RNAi) mechanisms of gene regulation. For Ago proteins to regulate gene expression through RNAi they must be loaded, or "programmed," with a single strand of small RNA. Natural small RNAs are typically double-stranded duplexes that require additional factors for efficient and specific loading into Ago proteins. Here, a protocol is described for investigating RNAi programming through loading of human Ago2 using radiolabeled small interfering RNA (siRNA) and HeLa cell extracts. This protocol provides an Ago loading assay to study RNAi programming when starting with crude or partially purified cell extracts. The Ago loading assay should prove useful for studying other Ago proteins using a variety of mammalian cell extracts.

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